羊源枯草芽孢杆菌分离鉴定及益生特性分析

来源：中国畜牧兽医杂志2025年第4期北京时间：

作者：李永健, 张润泽, 吴忧, 赵鹏飞, 焦陇玲, 周明, 齐亚银, 任静静

单位：石河子大学动物科技学院, 石河子 832003

摘要：【目的】筛选益生特性好的枯草芽孢杆菌。【方法】从规模化羊场采集10份粪便和6份环境样品，通过LB固体培养基进行细菌分离纯化。利用形态学观察、生化鉴定和16S rRNA基因PCR扩增技术对菌株进行鉴定。然后通过溶血性测试、药敏试验、耐药与毒力基因分析、体外抑菌试验、酸碱及胆盐耐受性测试，以及小鼠安全性评估，全面评价菌株的益生特性。【结果】分离到的2株细菌在血平板上形成不规则白色突出菌落，表面粗糙呈山脉状，周围呈现明显的溶血环。生化鉴定结果显示，分离到的2株菌触酶、VP、葡萄糖、木糖、L-阿拉伯糖、甘露醇、蔗糖、柠檬酸盐、硝酸盐还原、淀粉水解、明胶液化、麦芽糖、蕈糖试验结果均呈阳性，硫化氢、枸橼酸盐、半乳糖试验均呈阴性，初步判定为枯草芽孢杆菌并分别命名为K1、K2。16S rRNA基因PCR扩增测序结果显示,分离株与枯草芽孢杆菌参考菌株的相似性为98%～100%，在系统进化树中处于同一分支，而与贝莱斯芽孢杆菌、沙门菌、屎肠球菌处于不同分支。抑菌试验结果表明，分离菌株K1、K2的上清对金黄色葡萄球菌有较好的抑菌效果，对大肠杆菌和沙门菌没有抑菌效果。药敏试验结果表明，分离菌株K1、K2对受试的青霉素、阿莫西林、头孢噻肟、恩诺沙星、氧氟沙星、复方新诺明、氟苯尼考、万古霉素具有较高的敏感性，对庆大霉素、大观霉素、罗红霉素中介，对四环素、多黏菌素B、林可霉素耐药。毒力基因检测结果表明，分离菌K1和K2不携带nheA、bceT、entFM、ces、cytK、hblA、hblC、hblD等毒力基因。耐药基因检测结果表明，分离菌K1携带aph(3')-Ⅰa耐药基因，不携带MCR-1、bcr、floR、rpsl、strB、aadB、aac(6')-Ⅰb、blaTEM、blaCTX、ermA、ermC、qnrA、qnrB、sul1、sul2、tetC、tetA、tetM、catA2耐药基因，而K2株携带ermA耐药基因，不携带其他验证的耐药基因。2株分离菌在pH为4.0、5.0、6.0、8.0、9.0、10.0的LB液体培养基中均有较好的生长活性，其中菌株K2在pH为3.0的LB液体培养基中仍然具有较好的生长活性，在含0.3%、0.5%、0.7%、1.0%牛胆盐的LB液体培养基中，2株分离菌仍然可以存活，并保持相对较好的生长活性。小鼠体内安全性试验表明，小鼠未出现明显的病理变化。【结论】本研究分离的2株细菌均为枯草芽孢杆菌，具有溶血性，对金黄色葡萄球菌有抑菌作用并具备较强的生长活性。在模拟胃肠道环境中，其耐酸、耐碱、耐胆盐能力方面表现出多样性，且对多数抗菌药保持敏感性，未检测到主要毒力基因，对小鼠具有良好的安全性，具有作为益生菌的潜力，可进一步探索其在畜牧养殖和人类健康领域的应用。

关键词：枯草芽孢杆菌;分离鉴定;益生特性

基金资助：兵团农业关键核心技术攻关项目(2023AA310);天山英才“三农骨干人才”项目(2024-97号人才发展基金);石河子大学科技成果转化项目(CGZH202104);石河子大学高层次人才科研启动项目(RCZK202042)