犬副流感病毒N蛋白的真核表达及多克隆抗体制备

来源：中国畜牧兽医杂志2025年第5期北京时间：

作者：刘敏, 程淮, 郑珍珍, 张梦思, 张贺伟, 任静强

单位：1. 温州大学病毒学研究所, 温州 325035;2. 洛阳职业技术学院食品与药品学院, 洛阳 471400

摘要：【目的】通过真核表达系统表达犬副流感病毒(Canine parainfluenza virus，CPIV)N蛋白，并制备N蛋白多克隆抗体，为后续CPIV N蛋白的鉴定及病毒在生命周期过程中的功能研究提供基础。【方法】构建CPIV N蛋白真核表达质粒pCAGGS-N，经PCR和Western blotting验证质粒功能后，免疫小鼠，制备CPIV N蛋白多克隆抗体；ELISA法测定抗体效价达到理想效价后，终止免疫；通过Western blotting、间接免疫荧光试验对抗体进行鉴定和分析，并测定多克隆抗体的中和活性。【结果】酶切连接、测序验证结果显示，成功构建了CPIV N蛋白真核表达重组质粒pCAGGS-N，且该质粒可在真核细胞中正常转录和翻译；通过DNA免疫成功制备了小鼠抗CPIV N蛋白多克隆抗体，效价为1∶128 000。Western blotting结果显示，该抗体可与纯化的CPIV病毒粒子及外源性表达的CPIV N蛋白结合，分子质量约为59 ku。间接免疫荧光试验结果显示，制备的多克隆抗体可特异性识别并结合具有空间构象的CPIV N蛋白，但该多克隆抗体不具有病毒中和活性。【结论】本试验成功构建了真核表达质粒pCAGGS-N，并通过DNA免疫方法成功制备了小鼠抗CPIV N蛋白的多克隆抗体，该抗体具有良好的反应性和特异性，但未显示出中和病毒的活性，为进一步研究CPIV N基因的功能及其他细胞免疫学试验提供了研究基础。

关键词：犬副流感病毒(CPIV);核衣壳蛋白;真核表达;DNA免疫;多克隆抗体

基金资助：温州大学引进人才科研启动经费(QD2023014);温州市基础性科研资助项目(20231107)