鸡补体受体Ⅱ蛋白兔多克隆抗体制备及鉴定

来源：中国畜牧兽医杂志2025年第6期北京时间：

作者：孟昭英, 靳换, 涂敏, 胡格, 章振华

单位：1. 北京农学院动物科学技术学院, 北京 102206;2. 北京市农林科学院畜牧兽医研究所, 北京 100097

摘要：【目的】补体受体Ⅱ(complement receptor 2，CR2)与其生理学配体C3d相互作用能桥连先天性免疫反应和适应性免疫反应，放大下游信号的转导现象，显著降低抗原刺激B细胞活化的阈值，可将B细胞对抗原的敏感性提高1 000～10 000倍，对于激活B细胞及启动免疫反应至关重要。本研究旨在制备兔源鸡CR2(chCR2)多克隆抗体，为检测chCR2蛋白的表达情况提供工具，也为深入探究chCR2蛋白的功能和作用奠定基础。【方法】将pTT5-His-chCR2-ΔTM重组质粒转染至HEK293F细胞中，在真核表达系统HEK293F细胞中表达重组chCR2蛋白(His-chCR2-ΔTM)，经Western blotting对蛋白表达进行分析，利用镍柱亲和层析纯化系统纯化chCR2蛋白并进行SDS-PAGE鉴定。用纯化出的chCR2蛋白免疫新西兰大白兔制备抗chCR2血清多克隆抗体；利用ELISA方法检测chCR2兔血清的效价；利用Western blotting和间接免疫荧光试验(indirect immunofluorescence assay，IFA)检测chCR2血清多克隆抗体的特异性和灵敏度。【结果】重组His-chCR2-ΔTM蛋白可在HEK293F细胞系表达，利用镍柱亲和层析法纯化得到的重组His-chCR2-ΔTM 蛋白浓度为4.439 mg/mL，分子质量为45 ku。ELISA检测结果显示，chCR2血清多克隆抗体效价最高为1∶32 768 000；Western blotting和IFA结果表明，chCR2蛋白可被chCR2血清多抗体特异性识别；Western blotting检测时，chCR2血清多克隆抗体的稀释度为1∶5 000时特异性最好；IFA检测时，chCR2血清多克隆抗体最大稀释度为1∶1 600。【结论】本研究成功制备了chCR2蛋白兔多克隆抗体，该抗体效价较高且特异性较好，为后续检测chCR2蛋白及研究chCR2蛋白的功能提供了试验基础。

关键词：鸡补体受体Ⅱ;表达纯化;多克隆抗体

基金资助：国家自然科学基金青年基金(32202793)；北京市农林科学院创新能力建设(KJCX20230424、KJCX20240338)