猪轮状病毒VP6蛋白的真核表达及单克隆抗体制备和应用

来源：中国畜牧兽医杂志2025年第6期北京时间：

作者：魏黄思梧, 张兴艺, 黄校花, 刘昌锦, 武文杰, 沈政乔, 罗锋, 邓舜洲

单位：1. 江西农业大学动物科学技术学院, 南昌 330045;2. 江西省中国科学院庐山植物园, 九江 332900;3. 江西金伊博生物科技有限公司, 南昌 330013

摘要：【目的】制备抗猪轮状病毒(Porcine rotavirus，PoRV)VP6蛋白单克隆抗体，为PoRV检测方法的开发提供参考。【方法】以痘苗病毒启动子P28为VP6的启动子，以G3型PoRV核酸为模板扩增VP6基因，通过无缝克隆方法将VP6基因片段克隆至pSWE178质粒，构建重组质粒pSWE178-P28-VP6；利用同源重组和蚀斑纯化技术获得表达VP6蛋白的重组猪痘病毒rSWE178-P28-VP6，用SDS-PAGE鉴定VP6蛋白表达形式。以G9型PoRV为免疫原免疫BALB/c小鼠，取免疫小鼠脾细胞和SP2/0骨髓瘤细胞融合，以重组病毒表达的VP6蛋白为检测抗原，通过间接ELISA筛选分泌抗VP6单克隆抗体的杂交瘤细胞。通过间接免疫荧光试验(IFA)检测单克隆抗体与G3、G4、G5、G9型PoRV的反应原性，选择其中1株单克隆抗体对人工感染PoRV的猪肠道组织进行免疫组化(IHC)检测。【结果】在构建了表达PoRV VP6蛋白的重组质粒pSWE178-P28-VP6基础上，成功构建了表达PoRV VP6蛋白的重组猪痘病毒，表达的蛋白分子质量大小45 ku，为可溶性表达。采用杂交瘤技术制备单克隆抗体，筛选获得29株分泌抗VP6单克隆抗体的杂交瘤细胞株。IFA结果显示，26株单克隆抗体均能与G3、G4、G5、G9型PoRV反应，但荧光亮度存在差异。IHC检测结果显示，单克隆抗体能与感染PoRV的临床样品发生特异性免疫反应。【结论】本研究利用真核表达系统成功表达了PoRV VP6蛋白，采用杂交瘤技术筛选获得29株抗VP6单抗隆抗体，其中26株均能与G3、G4、G5、G9型PoRV反应。试验结果为PoRV免疫学检测方法的建立奠定了基础。

关键词：猪轮状病毒(PoRV);VP6蛋白;真核表达;单克隆抗体

基金资助：江西省现代农业产业技术体系建设专项基金资助项目(JXARS-03)