夏南牛子宫外泌体miRNA在牛胚胎发育和着床中的作用研究

来源：中国畜牧兽医杂志2025年第6期北京时间：

作者：张志浩, 鲁立刚, 张子敬, 王香南, 闵佳, 韩艺伟, 彭晟坤, 栾曼茹, 刘奥兵, 施巧婷, 王二耀

单位：1. 河南省农业科学院畜牧研究所, 郑州 450002;2. 河南农业大学动物科技学院, 郑州 450002;3. 毕节市农业科学院, 毕节 551700

摘要：【目的】探索超数排卵后获取不同胚胎数量的牛子宫冲胚液外泌体miRNA的表达差异，以明确子宫冲胚液外泌体miRNA在牛胚胎发育和着床中的调控机制。【方法】选取15头3～6岁、480～600 kg夏南牛进行超数排卵、同期发情和人工授精。在人工授精后第7天，冲洗牛子宫以获取囊胚，根据国际胚胎生产的平均水平5.5枚作为标准，选取获取的囊胚数量多的3头夏南牛(试验组)和获取的囊胚数量少的2头夏南牛(对照组)，收集子宫冲胚液进行外泌体分离与鉴定，并提取外泌体miRNA进行测序分析；对差异表达miRNA进行靶基因预测，并对靶基因进行GO功能和KEGG通路富集分析。随机选取4个miRNAs(bta-miR-2888、bta-miR-11987、bta-miR-2484、bta-miR-27a-3p)进行实时荧光定量PCR验证。【结果】5个样本的囊泡粒径为30～150 nm，符合外泌体的特征。共筛选到14个差异表达miRNAs，其中9个miRNAs表达上调，5个miRNAs表达下调。差异表达miRNAs共预测到8 703个靶基因。GO功能富集分析表明，靶基因主要富集在与发育过程调节、多细胞生物发育调控、调节运输、发育过程的正向调节、细胞连接等功能有关的条目。KEGG通路富集分析表明，显著富集的MAPK和Hedgehog信号通路等与胚胎发育和着床相关，提示子宫冲胚液外泌体可能参与调控胚胎发育和着床。4个miRNAs的实时荧光定量PCR结果与转录组测序结果相一致。【结论】本研究从夏南牛子宫冲胚液中分离得到了外泌体，丰富了外泌体研究的物种，为夏南牛后续外泌体研究提供了材料。共筛选出14个差异表达miRNAs，有8个miRNAs与胚胎发育和着床相关。子宫内外泌体中miRNA的变化可能影响牛胚胎发育和着床。

关键词：夏南牛;外泌体;miRNA;胚胎发育;胚胎着床

基金资助：河南省肉牛产业技术体系项目(HARS-22-13-S)；国家肉牛牦牛产业技术体系(CARS-37)；河南省重大科技专项“地方畜禽精准快育种体系构建与新品种选育”(221100110200)；河南省农业科学院科技创新团队项目“牛羊繁育与生产”(2024TD25)