西门塔尔牛胰腺间充质干细胞分离培养及生物学特性研究

来源：中国畜牧兽医杂志2025年第6期北京时间：

作者：王仲发, 刘晏辰, 闫炎, 李旻娟, 何玉楠, 关伟军, 刘文忠

单位：1. 山西农业大学动物科学学院, 太谷 030801;2. 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所, 北京 100193

摘要：【目的】分离培养西门塔尔牛胰腺间充质干细胞，建立西门塔尔牛胰腺间充质干细胞系，研究其生物学特性，为西门塔尔牛种质资源的保存提供参考。【方法】采集西门塔尔牛胰腺组织，利用酶消法和组织块贴壁法分离培养胰腺间充质干细胞，并对胰腺间充质干细胞的生物学特性进行鉴定；利用免疫荧光试验和半定量PCR测定细胞表面标记物(CD34、CD73、CD90、CD166)的表达情况；通过绘制P4、P10、P16代细胞生长曲线及计算群体倍增时间测定细胞增殖能力；通过细胞克隆试验测定细胞克隆形成率，通过划痕试验计算细胞迁移率；对纯化后的细胞分别进行成骨细胞、脂肪细胞、软骨细胞诱导分化，检测胰腺间充质干细胞多向分化能力，并通过染色体核型分析试验检测细胞的遗传稳定性。【结果】采用组织块贴壁法培养可得到胰腺间充质干细胞，且传代到第3代基本纯化。半定量PCR结果显示，表面标记物(CD73、CD90、CD166)呈阳性表达，而与造血细胞相关的表面抗原CD34呈阴性表达。西门塔尔牛胰腺间充质干细胞呈现典型的S型生长曲线，P4、P10、P16代细胞群体倍增时间分别为40.22、43.09和44.50 h，细胞克隆形成率分别为26.25%、19.00%和13.50%。划痕试验测定第3代细胞迁移率为44.44%。在体外诱导分化胰腺间充质干细胞后，结果呈现出清晰的脂滴、软骨团和钙结节。核型分析结果判定，西门塔尔牛胰腺间充质干细胞为正常二倍体核型(2n=60，XY)，染色体组未发生变异。【结论】从西门塔尔牛胰腺组织分离培养的胰腺间充质干细胞能够稳定遗传，增殖能力强，且具有向成骨细胞、脂肪细胞、软骨细胞分化的潜能。研究结果可为西门塔尔牛组织修复提供新方法，为西门塔尔牛种质资源的保护和保存提供种子细胞。

关键词：西门塔尔牛;胰腺间充质干细胞;分离培养;诱导分化

基金资助：国家重点研发计划(2021YFP1200303)