双黄连调控跨内皮淋巴细胞抗禽流感病毒的研究

来源：中国畜牧兽医杂志2025年第7期北京时间：

作者：张朝晖, 孙志刚, 穆祥, 冯波, 梁宏伟, 刘晓晔, 张倩

单位：1. 北京农学院动物科学技术学院, 北京 102206;2. 北京农学院, 兽医学(中医药)北京市重点实验室, 北京 102206

摘要：【目的】 探究双黄连(Shuanghuanglian，SHL)通过调控跨内皮淋巴细胞抗H9N2亚型抗禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)感染的作用机制，为抗流感病毒中药的研发提供新思路和理论依据。【方法】 采用MTT法检测不同浓度和不同作用时间含SHL培养基对大鼠肺微血管内皮细胞(rat pulmonary microvascular endothelial cells,rPMVECs)的药物毒性，筛选合适的药物作用浓度和时间。探究SHL对H9N2亚型AIV在rPMVECs上复制动力学的影响。对影响大鼠外周淋巴细胞增殖能力的各项指标(淋巴细胞浓度、FBS浓度和培养时间)进行优化。在此基础上建立rPMVECs与淋巴细胞的Transwell共培养体系，将rPMVECs接种上室，分为6组：活病毒组、灭活病毒组、活病毒加中药组、灭活病毒加中药组、内皮组及空白组，接种淋巴细胞。H9N2亚型AIV与跨内皮淋巴细胞孵育后接种MDCK细胞，通过MDCK细胞死亡数和上清液中的活病毒量评估SHL的抗病毒效果。【结果】 浓度≤100 μg/mL的SHL与rPMVECs共培养24 h后显微镜下未观察到明显的细胞病变。在rPMVECs完整的情况下，当SHL浓度为100 μg/mL时，其与被H9N2亚型AIV感染的rPMVECs共作用24 h时对H9N2亚型AIV增殖的抑制作用最强。灭活病毒组的MDCK死亡细胞数和活病毒量显著低于活病毒组(P＜0.05)；活病毒加中药组的MDCK死亡细胞数和活病毒量显著低于内皮组和活病毒组(P＜0.05)。【结论】 SHL在保护宿主抗H9N2亚型AIV的过程中发挥着重要作用，其是通过保护内皮细胞的完整性，激活内皮细胞募集淋巴细胞从而发挥免疫作用，进而降低病毒载量，起到抗病毒的作用。

关键词：双黄连;H9N2亚型禽流感病毒;大鼠肺微血管内皮细胞;淋巴细胞

基金资助：国家自然科学基金(32202852)；北京农学院青年教师科研创新能力提升计划(QJKC2022017)；北京农学院青年科学基金(QNKJ202108)