猪细小病毒NS1蛋白单链抗体库的构建及筛选

来源：中国畜牧兽医杂志2025年第7期北京时间：

作者：张丽萌, 李闰婷, 宋月, 聂晓宁, 孔莉, 单靖微, 许盈盈, 王林青, 陈龙欣

单位：1. 郑州师范学院分子生物学实验室, 郑州 450044;2. 郑州师范学院生命科学学院, 郑州 450044;3. 河南农业大学动物医学院, 郑州 450046

摘要：【目的】 筛选特异性抗猪细小病毒(Porcine parvovirus，PPV)非结构蛋白NS1的单链抗体(scFv)，为后续研究PPV奠定基础。【方法】 通过原核表达系统诱导表达并纯化PPV NS1蛋白，利用重组NS1蛋白进行动物免疫，检测血清效价水平后，采集小鼠脾脏提取总RNA并逆转录成cDNA，以其为模板扩增抗体重链可变区(variable domain of heavy chains，VH)和轻链可变区(variable domain of light chains，VL)序列；通过重叠延伸PCR扩增获得scFv基因，将其与酶切的pSEXRTL2噬菌体载体连接并电转化大肠杆菌XLⅠ-Blue感受态细胞，构建鼠源性抗PPV NS1的scFv抗体文库，并测定文库质量及库容量；利用噬菌体展示技术筛选对NS1蛋白具有特异性的scFv，通过ELISA和Western blotting检测抗原与阳性噬菌体克隆的亲和力。【结果】 本试验成功表达纯化获得可溶性PPV NS1重组蛋白；构建的鼠源抗NS1 scFv文库的库容量为2.7×107 CFU/mL，文库阳性率为87.5%；通过4轮“吸附-洗脱-富集”噬菌体筛选，最终获得2株与PPV NS1蛋白特异性结合的亲和力较高的scFv。【结论】 本研究通过原核表达纯化重组蛋白NS1，成功构建鼠源抗PPV NS1蛋白的scFv噬菌体文库，利用噬菌体展示技术筛选获得了可与NS1重组蛋白特异性结合的scFv。试验结果为进一步研发抗PPV药物及诊断试剂提供依据。

关键词：猪细小病毒(PPV);单链抗体(scFv);NS1蛋白;噬菌体文库

基金资助：国家自然科学基金项目(32071447)；河南省科技攻关计划项目(232102311138)；河南省高校科技创新人才支持计划(22HASTIT041)；河南省高等学校重点科研项目(24B230008)；河南省大学生创新创业训练计划项目(国家级)(202312949004)