gga-miR-1574-5p生物学功能预测及其与G3BP2基因靶向关系验证

来源：中国畜牧兽医杂志2025年第7期北京时间：

作者：平玉宇, 黄烜, 蔡清清, 王强州, 王佳兴, 白皓, 陈世豪, 常国斌

单位：1. 扬州大学动物科学与技术学院, 扬州 225009;2. 扬州大学兽医学院, 扬州 225009

摘要：【目的】 gga-miR-1574-5p是细胞营养匮乏反应相关的miRNA。本研究旨在分析gga-miR-1574-5p功能并鉴定其与G3BP2基因之间的靶向关系，为进一步解析gga-miR-1574-5p的生物学功能提供科学依据。【方法】 通过在线工具miRBase获得gga-miR-1574-5p的成熟序列；使用TargetScan数据库预测gga-miR-1574-5p的靶基因进行GO功能与KEGG通路富集分析，并预测其与G3BP2基因的结合位点；使用双荧光素酶报告基因试验验证gga-miR-1574-5p与G3BP2的靶向关系；运用实时荧光定量PCR检测过表达gga-miR-1574-5p对G3BP2基因表达影响；采用Western blotting检测鸡巨噬细胞中gga-miR-1574-5p对G3BP2蛋白的表达影响。【结果】 GO功能富集显示，gga-miR-1574-5p的潜在靶基因主要富集于细胞核、细胞质膜等细胞组分；RNA聚合酶Ⅱ的转录调控、RNA聚合酶Ⅱ的正向转录调控等生物过程；以及蛋白质结合、ATP结合等分子功能。KEGG通路富集显示，靶基因主要富集到卵母细胞减数分裂、TGF-β信号通路和线粒体自噬通路等。TargetScan数据库检测到gga-miR-1574-5p种子区与鸡G3BP2基因3'-非翻译区(3'-UTR)存在结合位点；与G3BP2-3'-UTR野生型质粒和NC-mimics共转染组相比，G3BP2-3'-UTR野生型质粒和gga-miR-1574-5p mimics共转染组的双荧光素酶活性极显著降低(P＜0.01)。实时荧光定量PCR结果表明，与NC-mimics组相比，转染20 nmol/L gga-miR-1574-5p mimics后对G3BP2基因表达水平无显著影响(P＞0.05)，而转染30、50 nmol/L gga-miR-1574-5p mimics组中G3BP2基因表达量显著或极显著降低(P＜0.05；P＜0.01)。Western blotting结果显示，转染gga-miR-1574-5p mimics(20、30、50 nmol/L)后G3BP2蛋白表达水平均极显著低于转染NC-mimics组(P＜0.01)。【结论】 gga-miR-1574-5p与G3BP2基因存在靶向关系，且gga-miR-1574-5p能通过与G3BP2-3'-UTR特异性结合抑制鸡巨噬细胞中G3BP2基因及蛋白的表达。

关键词：gga-miR-1574-5p;靶基因;G3BP2基因')">G3BP2基因;应激颗粒

基金资助：国家重点研发计划(2022YFD1800303)；国家肉鸡产业技术体系(CARS-41)