地菍总黄酮改善大鼠非酒精性脂肪肝的作用机制

来源：中国畜牧兽医杂志2025年第8期北京时间：

作者：李笑笑, 杨秋莉, 柯金城, 林惠旅, 刘呈香, 杨媛媛, 农丕豪, 蒋寒婷, 李丽

单位：1. 广西中医药大学药学院, 广西高校中药神经-代谢及免疫药理重点实验室, 南宁 530200;2. 劲牌研究院, 黄石 435000

摘要：【目的】 探讨地菍总黄酮(total flavonoids of Melastoma dodecandrum Lour.，TFMD)对大鼠非酒精性脂肪肝(nonalcoholic fatty liver disease,NAFLD)的影响及作用机制。【方法】 体外试验将HepG2细胞分为6组，空白对照组、NAFLD模型组、TFMD高、中、低剂量组(25、50、100 μg/mL TFMD)及铁死亡抑制剂组(2 μmol/L Fer-1)，每组6个复孔。除空白对照组外，其余各组均采用0.25 mmol/L棕榈酸处理HepG2细胞24 h建立细胞模型，TFMD低、中、高剂量组和铁死亡抑制剂组HepG2细胞分别用相应浓度的TFMD和Fer-1处理24 h。细胞毒性试验测定细胞活力；利用相关试剂盒检测HepG2细胞内总胆固醇(TC)和甘油三酯(TG)含量；通过检测超氧化物歧化酶(SOD)活性、谷胱甘肽(GSH)和丙二醛(MDA)含量，评估TFMD对NAFLD体外模型脂质过氧化水平的影响；通过DCFH-DA荧光探针法检测HepG2细胞活性氧(ROS)水平。体内试验采用高脂肪饲料喂养SD大鼠，建立NAFLD大鼠模型，将大鼠随机分为6组：空白对照组、NAFLD模型组、TMFD高、中、低剂量组、多烯磷脂酰胆碱(PPC)组，每组10只。判定造模成功后即给予相应药物干预，PPC组灌胃给予PPC(0.07 g/kg BW)，TMFD低、中、高剂量组分别灌胃给予TMFD(0.33、0.50和0.75 g/kg BW)，共干预6周，空白对照组和NAFLD模型组给予等体积生理盐水。治疗期结束后，利用相关试剂盒检测NAFLD大鼠血清中的TG、TC、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)含量、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)活性及NAFLD大鼠肝脏中MDA、Fe2+含量、总抗氧化能力(T-AOC)、过氧化氢酶(CAT)活性；利用HE和油红O分别染色观察NAFLD大鼠肝脏病理变化，运用Western blotting检测各组大鼠肝脏组织中核转录因子E2相关因子2(Nrf2)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)、过氧化物酶体增殖受体γ辅激活因子1α(PGC-1α)、NAD(P)H醌脱氢酶1 (NQO1)、RelA(NF-κB P65)、谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)、Kelch样ECH相关蛋白1(Keap1)蛋白表达。【结果】 体外试验结果显示，与空白对照组相比，NAFLD模型组HepG2细胞活力极显著降低(P＜0.01)，TG、TC和MDA含量极显著升高(P＜0.01)，GSH含量及SOD活性极显著降低(P＜0.01)，ROS 水平极显著上升(P＜0.01),荧光强度明显增强。与NAFLD模型组相比，TFMD各剂量组及Fer-1组HepG2细胞活力极显著升高(P＜0.01)；TG、TC和MDA含量极显著降低(P＜0.01)，GSH含量及SOD活性极显著升高(P＜0.01)，ROS水平极显著下降(P＜0.01),荧光强度明显降低。体内试验结果显示，与空白对照组相比，NAFLD模型组大鼠血清中HDL-C含量极显著降低(P＜0.01)，TC、TG、LDL-C含量极显著升高(P＜0.01)；与NAFLD模型组相比，TMFD各剂量组及PPC组大鼠血清中HDL-C含量极显著或显著上升(P＜0.01；P＜0.05)，LDL-C含量极显著或显著降低(P＜0.01；P＜0.05)，TG和TC含量极显著降低(P＜0.01)。病理学观察结果显示，与空白对照组相比，NAFLD模型组大鼠肝细胞出现大量的脂肪空泡，排列错乱不均，肝细胞内脂肪变性程度严重，肝细胞中出现大量的红色脂滴，脂滴体积变大并有一定的聚集趋势。TMFD各剂量组和PPC组肝细胞形态齐整，脂肪变性程度显著下降，肝脏中红色脂滴的数量减少，体积变小。与空白对照组相比，NAFLD模型组大鼠血清中AST和ALT活性极显著升高(P＜0.01)，肝脏中CAT活性和T-AOC极显著下降(P＜0.01)，MDA和Fe2+含量极显著升高(P＜0.01)；与NAFLD模型组相比，TFMD各剂量组和PPC组大鼠血清中AST和ALT活性极显著或显著降低(P＜0.01；P＜0.05)，TFMD各剂量组及PPC组大鼠肝脏中MDA含量极显著或显著降低(P＜0.01；P＜0.05)，T-AOC极显著或显著上升(P＜0.01；P＜0.05)，CAT活力极显著升高(P＜0.01)，Fe2+含量极显著下降(P＜0.01)。Western blotting结果表明，与空白对照组相比，NAFLD模型组大鼠肝脏中PPARγ、PGC-1α、Nrf2、NQO1和GPX4蛋白表达量极显著降低(P＜0.01)，Keap1和NF-κB P65蛋白表达量极显著升高(P＜0.01)；与NAFLD模型组相比，TFMD各剂量组和PPC组大鼠肝脏中PPARγ、PGC-1α、Nrf2、NQO1和GPX4蛋白表达量极显著升高(P＜0.01)，Keap1和NF-κB P65蛋白表达量极显著降低(P＜0.01)。【结论】 TFMD对NAFLD的干预作用机制与调节机体脂质过氧化失衡、铁代谢紊乱，进而抑制肝脏中相关细胞发生铁死亡相关，TFMD通过调节PPARγ/PGC-1α/Nrf2信号通路，延缓NAFLD疾病进程。

关键词：地菍总黄酮;非酒精性脂肪肝;铁死亡;PPARγ/PGC-1α/Nrf2通路;作用机制

基金资助：2024年广西中医药大学校级科研项目(X202410600036)；广西高水平中医药重点学科中药药理学(桂中医药科教发〔2023〕13号)；2022年广西中医药大学校级科研项目(2022MS013)