表达红色荧光蛋白鸡白痢沙门菌的构建与应用

来源：中国畜牧兽医杂志2025年第8期北京时间：

作者：刘子敬, 孙佳, 张丽, 罗成龙

单位：1. 广东海洋大学滨海农业学院, 湛江 524000;2. 广东省农业科学院动物科学研究所, 猪禽种业全国重点实验室, 广州 510640;3. 仲恺农业工程学院动物科技学院, 广州 510225

摘要：【目的】 构建表达红色荧光蛋白(mCherry)的鸡白痢沙门菌，并探究其在巨噬细胞中的定位示踪作用。【方法】 将外源基因mCherry插入原核表达载体pUC19获得pUC19-mCherry质粒，以鸡白痢沙门菌基因组为模板，通过PCR扩增其内源性毒力基因virK启动子，并将其插入pUC19-mCherry质粒以启动mCherry，构建重组质粒PvirK-mCherry并转化鸡白痢沙门菌CVCC 533菌株，挑取单克隆后通过荧光正置显微镜检测荧光表达。将感染复数(MOI)为200的重组荧光菌株与小鼠单核巨噬细胞(RAW264.7)和禽巨噬细胞(HD11)共培养，经DAPI染色及流式细胞术检测两种巨噬细胞对荧光菌株的吞噬效果。【结果】 pUC19-mCherry质粒双酶切结果可见720 bp mCherry基因片段和2 600 bp的载体片段，转化大肠杆菌DH5α感受态细胞后可见红色荧光。重组质粒PvirK-mCherry测序结果显示，启动子成功插入pUC19-mCherry质粒，双酶切可见990 bp virK基因启动子片段和3 300 bp载体片段；荧光镜检转化PvirK-mCherry质粒的鸡白痢沙门菌可见红色荧光。巨噬细胞吞噬试验结果显示，经DAPI染色后荧光镜检可见红色荧光鸡白痢沙门菌菌株聚集在蓝色细胞核周围；流式细胞术检测结果显示，RAW264.7细胞吞噬效率为88.06%，HD11细胞吞噬效率为34.18%。【结论】 本研究成功构建重组质粒PvirK-mCherry,转染鸡白痢沙门菌后表达红色荧光，且红色荧光菌株能被巨噬细胞吞噬。试验结果不仅有助于精确观察细菌在宿主细胞内的定位，还为研究沙门菌与宿主细胞的互作提供了经济有效的工具，对禽类健康和养殖业发展具有重要意义。

关键词：鸡白痢沙门菌;荧光菌株;巨噬细胞;吞噬

基金资助：广东省农业科学院协同创新中心项目(XT202217)；国家肉鸡产业技术体系岗位科学家项目(CARS-41)；农业生物育种重大项目(2023ZD0405305)