SOCE调控亚临床低钙血症奶牛单核巨噬细胞吞噬和黏附功能的研究

来源：中国畜牧兽医杂志2025年第8期北京时间：

作者：李思瑶, 季子崴, 李蕾, 张靖淇, 岳柏晨, 尹玉凤, 徐闯, 杨威, 张冰冰

单位：1. 黑龙江八一农垦大学生命科学技术学院, 大庆 163319;2. 中国农业大学动物医学院, 北京 100193;3. 黑龙江八一农垦大学动物科技学院, 大庆 163319

摘要：【目的】 探究钙池操控的钙内流(store operated Ca2+ entry,SOCE)对奶牛单核巨噬细胞吞噬和黏附功能的影响。【方法】 采集健康奶牛(对照，Con)及亚临床低钙血症奶牛(hypocalcemia,Hyp)外周血液，利用磁珠法分离并体外培养CD14＋单核巨噬细胞。取亚临床低钙血症奶牛单核巨噬细胞分为3组，分别为Hyp、毒胡萝卜素(thapsigarsin，TG)处理组(Hyp＋TG)和2-氨基乙基联苯基硼酸酯(2-aminoethyl diphenylborinate,2-APB)处理组(Hyp＋2-APB组)。通过流式细胞术检测细胞内Ca2＋水平,利用实时荧光定量PCR和Western blotting分别检测SOCE相关因子mRNA和蛋白表达量；通过激光共聚焦和免疫荧光检测单核巨噬细胞吞噬和黏附情况，并检测单核巨噬细胞吞噬和黏附因子的表达。【结果】 流式细胞术检测结果显示，与Con组相比，Hyp组单核巨噬细胞内Ca2＋水平极显著降低(P＜0.01)。实时荧光定量PCR结果显示，与Con组相比，Hyp组单核巨噬细胞中钙离子释放激活的钙通道蛋白1(calcium release-activated calcium modulator 1,ORAI1)、基质相互作用分子1(stromal interaction molecule 1,STIM1)、STIM2、选择素L(selectin L,SELL)、ORAI2、ORAI3以及吞噬因子髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)基因表达量均极显著或显著降低(P＜0.01；P＜0.05)。Western blotting结果显示，与Con组相比，Hyp组单核巨噬细胞中ORAI2、ORAI3、STIM2、ORAI1和STIM1蛋白表达量极显著或显著降低(P＜0.01；P＜0.05)。同时，与Con组相比，Hyp组单核巨噬细胞吞噬和黏附能力显著或极显著降低(P＜0.05；P＜0.01)。TG处理后，与Hyp组相比，亚临床低钙血症奶牛单核巨噬细胞中ORAI1、ORAI2、MPO、ORAI3、STIM1、STIM2和SELL基因表达量显著或极显著升高(P＜0.05；P＜0.01)，ORAI1、ORAI3、STIM1、STIM2和ORAI2蛋白表达水平显著或极显著上调(P＜0.05；P＜0.01)；细胞吞噬、黏附能力均显著或极显著增强(P＜0.05；P＜0.01)。2-APB处理后，与Hyp组相比，亚临床低钙血症奶牛单核巨噬细胞中ORAI1、ORAI2、MPO、ORAI3、STIM1、STIM2和SELL基因表达量显著或极显著降低(P＜0.05；P＜0.01)，ORAI2、STIM2、ORAI1、ORAI3和STIM1蛋白表达量显著或极显著降低(P＜0.05；P＜0.01)；细胞吞噬、黏附能力极显著或显著减弱(P＜0.01；P＜0.05)。【结论】 TG激活SOCE后，亚临床低钙血症奶牛单核巨噬细胞内Ca2+水平升高，细胞吞噬和黏附能力增强；2-APB抑制SOCE后，亚临床低钙血症奶牛单核巨噬细胞内Ca2＋水平降低，细胞的吞噬和黏附功能减弱，表明SOCE参与调控单核巨噬细胞的吞噬和黏附作用。

关键词：钙池操控的钙内流(SOCE);单核巨噬细胞;吞噬;黏附

基金资助：国家重点研发计划青年科学家项目(2023YFD1802100)；黑龙江省“龙江科技英才”春雁支持计划青年英才项目(CYQN24048)