施马伦贝格病毒N蛋白原核表达及间接ELISA抗体检测方法的建立

来源：中国畜牧兽医杂志2025年第8期北京时间：

作者：李阳, 孙睿雪, 陈天杰, 刘思彤, 曹家慧, 赵建军

单位：黑龙江八一农垦大学动物科技学院, 大庆 163000

摘要：【目的】 建立一种具有良好特异性和敏感性的施马伦贝格病毒(Schmallenberg virus,SBV)抗体间接ELISA(indirect ELISA，iELISA)检测方法。【方法】 将SBV N蛋白编码基因全长序列克隆至pET-28a(+)质粒中，构建重组质粒pET-28a-SBV，利用大肠杆菌表达系统表达目的蛋白并用His镍柱进行纯化，经SDS-PAGE和Western blotting鉴定后，以纯化的SBV N蛋白作为检测抗原进行包被，建立一种iELISA方法，并对其包被条件、封闭液、封闭时间和血清孵育时间等反应条件进行优化，检测其阴阳性临界值、特异性、灵敏性和重复性。【结果】 SDS-PAGE结果显示，SBV N蛋白分子质量为30 ku；Western blotting结果显示，纯化后SBV N蛋白与SBV阳性血清能产生特异性反应。本研究建立的SBV iELISA检测方法最佳条件为：SBV N抗原包被浓度4 μg/mL、4 ℃包被12 h、1%明胶37 ℃封闭1 h、血清稀释度为1∶200、37 ℃孵育1 h、1∶6 000稀释的酶标二抗37 ℃孵育1 h，其阴阳性临界值为0.371。该iELISA检测方法仅与SBV阳性血清产生特异性反应，与牛副流感病毒3型(BPIV3)、牛轮状病毒(BRV)、牛冠状病毒(BCoV)、牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)、牛病毒性腹泻病毒(BVDV)和阿卡斑病毒(AKAV)阳性血清均无明显交叉反应，灵敏性较高，SBV阳性血清稀释度为1∶1 280时仍有明显反应。批间重复试验和批内重复试验变异系数均＜10%；与商品化试剂盒相比，其总符合率为94.57%。【结论】 本研究建立了一种以SBV N蛋白为检测抗原的SBV iELISA方法，该方法具有良好的特异性和敏感性，能运用于SBV血清学检测，试验结果为SBV的快速诊断提供更多选择。

关键词：施马伦贝格病毒(SBV);N蛋白;间接ELISA(iELISA);原核表达

基金资助：畜禽重要传染病快速诊断关键技术研发与推广(GA21B004)