克氏原螯虾新型凝集素PcLT的重组表达及应用

来源：中国畜牧兽医杂志2025年第8期北京时间：

作者：于洪敏, 李娟, 王岩, 徐艺娜, 刘艳

单位：大连三仪动物药品有限公司, 大连 116036

摘要：【目的】 对克氏原螯虾新型凝集素PcLT基因序列进行密码子优化，利用生物信息学软件分析该序列编码蛋白的理化性质及结构，通过原核表达系统表达PcLT重组蛋白，并评估其在虾白斑综合征病毒病中的应用效果。【方法】 从GenBank中获取PcLT基因序列(登录号:JQ670880.1)，以大肠杆菌密码子偏好对其进行优化，并利用生物信息学软件预测蛋白理化性质及二级结构、三级结构等。通过T4连接酶将PcLT基因片段与pET-32a(＋)载体连接构建重组质粒pET32a-PcLT，并利用大肠杆菌BL21(DE3)原核表达系统表达重组蛋白PcLT，使用Ni柱亲和层析法进行蛋白纯化，将重组蛋白PcLT与虾料混合饲喂感染白斑综合征病毒(White spot syndrome virus，WSSV)的病虾，检测其对虾白斑综合征病毒病的应用效果。【结果】 PcLT基因编码169个氨基酸，PcLT蛋白为稳定、疏水性蛋白，理论等电点为4.17，溶解度为0.645；该蛋白为非跨膜蛋白，含有27个磷酸化位点，有分泌性信号肽；PcLT蛋白二级结构主要包括α-螺旋(26.63%)、延伸链(21.30%)和无规则卷曲(52.07%)，三级结构主要以无规则卷曲为主。成功构建pET32a-PcLT重组质粒，表达并纯化了重组蛋白PcLT，其分子质量为33 ku；100 mL PcLT重组蛋白饲喂病虾5 d后，虾体内的白斑综合征病毒拷贝数下降，病毒检测结果由阳性转为阴性，试验虾吃料正常。【结论】 试验成功表达重组蛋白PcLT，其在抗虾白斑综合征病毒应用中效果良好，研究结果为虾养殖中的白斑综合征病毒防治及相关研究提供理论基础。

关键词：克氏原螯虾;新型凝集素PcLT;白斑综合征病毒

基金资助：辽宁省科学技术计划项目(2019JH1/10200002)