牛巴贝斯虫SBP2蛋白生物信息学分析及多克隆抗体制备

来源：中国畜牧兽医杂志2025年第8期北京时间：

作者：冯秀娟, 任冀超, 崔泽云, 赵雪晴, 李佳欣, 张杨, 张伟, 巴音查汗·盖力克, 郭庆勇, 李永畅

单位：新疆农业大学动物医学学院, 乌鲁木齐 830052

摘要：【目的】 探究牛巴贝斯虫(Babesia bovis)SBP2蛋白(spherical body protein 2，SBP2)的生物信息学特征并进行原核表达及多克隆抗体制备，为牛巴贝斯虫疫苗和诊断抗原筛选提供理论依据。【方法】 对牛巴贝斯虫SBP2基因进行扩增和克隆，运用Mega 7.0构建牛巴贝斯虫SBP2蛋白系统进化树，利用IEDB Analysis Resource等生物信息学方法对牛巴贝斯虫SBP2蛋白的磷酸化位点和B细胞抗原表位进行预测分析；对SBP2蛋白与弓形虫致密颗粒蛋白(GRA)的氨基酸序列比对分析；构建原核表达载体pET-28a-SBP2，诱导表达SBP2重组蛋白并进行蛋白纯化，通过Western blotting验证SBP2重组蛋白反应原性；以SBP2重组蛋白为免疫原，免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体，并利用间接ELISA方法检测其效价。【结果】 系统进化树显示，本研究牛巴贝斯虫SBP2蛋白与泰国株(OM46855)的氨基酸序列亲缘关系最近。生物信息学分析显示，SBP2蛋白包含17个B细胞抗原表位和31个磷酸化位点，其中包括12个丝氨酸位点、14个苏氨酸位点及5个酪氨酸位点。牛巴贝斯虫SBP2蛋白氨基酸序列与弓形虫GRA蛋白之间有很强的相关性。成功构建了重组质粒pET-28a-SBP2；Western blotting结果显示，SBP2重组蛋白分子质量大小约为35 ku，具有良好的反应原性；制备的多克隆抗体效价为1∶204 800。【结论】 本研究通过预测牛巴贝斯虫SBP2蛋白生物学特性，加深了对SBP2蛋白的认识，利用原核表达系统成功获得牛巴贝斯虫SBP2重组蛋白，并获得其小鼠源多克隆抗体，为进一步研究SBP2功能及其在牛巴贝斯虫致病机制中的作用奠定了基础。

关键词：牛巴贝斯虫;球状体蛋白2;生物信息学分析;原核表达;多克隆抗体

基金资助：自治区重大科技专项(2023A02007-2)；自治区创新团队(2023TSYCTD0008)；自治区高层次人才项目(2022)