牛白细胞介素-8单克隆抗体制备及应用

来源：中国畜牧兽医杂志2025年第8期北京时间：

作者：杨蕊, 靳家鑫, 张泽, 时文健, 张广智, 丁家波, 鑫婷

单位：1. 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所, 农业农村部动物生物安全风险预警及防控重点实验室(北方), 农业农村部兽用生物制品与化学药品重点实验室, 北京 100193;2. 福建农林大学动物科学学院, 福州 350000

摘要：【目的】 白细胞介素-8(IL-8)是重要的趋化因子，参与机体免疫反应，其水平升高与多种感染性疾病、自身免疫疾病等密切相关，也被鉴定为活动性肺结核病、结核性脑膜炎、牛结核病的检测靶标。本研究旨在制备针对牛IL-8的单克隆抗体，开发牛IL-8夹心ELISA检测试剂盒，用于牛血清或血浆中IL-8的定量检测，为牛结核(bovine tuberculosis,bTB)及其他炎症相关疾病的诊断及免疫学指标检测提供工具。【方法】 将牛IL-8基因分别连接至pGEX-6P-1和pcDNA3.1载体，并利用大肠杆菌与293F细胞进行表达，以GST亲和柱和镍柱纯化重组蛋白；采用真核表达的重组蛋白免疫BALB/c小鼠，利用淋巴细胞杂交瘤技术制备并筛选针对牛IL-8的单克隆抗体；通过棋盘法筛选最佳抗体对并建立夹心ELISA检测方法；定量检测排菌期结核病牛、非排菌期结核病牛和健康牛血浆中IL-8水平，评价单克隆抗体对天然牛IL-8的识别能力及其对结核病牛的检测效果。【结果】 SDS-PAGE结果显示，原核和真核表达系统制备的IL-8均以可溶形式表达，且纯化的蛋白纯度高于90%；经3轮亚克隆筛选共获得2B8、2F5等5株稳定分泌牛IL-8抗体的单克隆细胞株，亚型鉴定均为IgG1型；棋盘法筛选结果显示,4G10和3D5-HRP为最佳配对抗体；以4G10和3D5-HRP建立的ELISA方法对不同感染状态的结核病牛血浆进行定量检测，结果显示，结核病牛血浆中IL-8含量极显著高于健康牛(P＜0.01)。【结论】 成功制备抗牛IL-8的单克隆抗体并建立牛IL-8夹心 ELISA检测方法，可实现对天然牛IL-8的定量检测，有潜力用于结核病牛的筛查和牛免疫学指标检测。

关键词：牛;白细胞介素-8;单克隆抗体;ELISA;牛结核病

基金资助：“十四五”国家重点研发计划(2024YFD1800300)；中央级公益性科研院所基本科研业务费专项课题(2022-YWF-ZYSQ-01)