miR-26a-5p通过靶向PTEN基因调控山羊卵巢颗粒细胞的增殖

来源：中国畜牧兽医杂志2025年第8期北京时间：

作者：王尧悦, 史倩倩, 罗琪, 高林娜, 吴浩, 张建丽, 丁强

单位：1. 江苏农林职业技术学院畜牧兽医学院, 镇江 212400;2. 江苏省农业科学院畜牧研究所, 江苏省畜禽精准育种工程研究中心, 农业农村部种养结合重点实验室, 南京 210014;3. 西北农林科技大学动物科技学院, 杨凌 712100;4. 海安市大公镇畜牧兽医站, 南通 226600

摘要：【目的】 颗粒细胞的增殖受miRNA等多种因素的调控，其中，miR-26a-5p在山羊生长卵泡中显著富集，或与卵泡生长发育相关。试验旨在研究miR-26a-5p在山羊颗粒细胞增殖作用机制，以期丰富卵泡发育中分子调控网络。【方法】 采用实时荧光定量PCR分析miR-26a-5p在不同大小山羊卵泡中的表达情况；体外培养鉴定卵巢颗粒细胞，并在颗粒细胞中分别过表达和抑制miR-26a-5p。利用EdU增殖和MTT试验检测颗粒细胞转染后的增殖情况；利用双荧光素酶报告系统和Western blotting验证miR-26a-5p与靶基因PTEN间的互作关系。通过Western blotting分析颗粒细胞过表达或干扰miR-26a-5p表达后PI3K/Akt信号通路中相关蛋白的表达情况。【结果】 在不同大小的山羊卵泡中均检测到miR-26a-5p的表达，miR-26a-5p在卵母细胞中也有表达，其中，与其他直径卵泡(＜2、4～5和＞5 mm)的颗粒细胞相比，miR-26a-5p在中小卵泡(直径2～3 mm)颗粒细胞中显著富集(P＜0.05)。在体外培养的颗粒细胞中，过表达miR-26a-5p组增殖细胞比例显著高于NC mimics组(P＜0.05)；转染miR-26a-5p inhibitor的颗粒细胞与转染NC inhibitor相比增殖比例显著减少(P＜0.05)。双荧光素酶报告试验结果显示，与突变组相比，miR-26a-5p靶向PTEN基因3'-UTR的种子序列显著降低了荧光素酶活性(P＜0.05)。Western blotting结果显示，与转染NC mimics组相比，颗粒细胞中过表达miR-26a-5p可显著降低PTEN蛋白的表达(P＜0.05)，过表达miR-26a-5p 96 h仍可检测到磷酸化蛋白p-AKT的表达上调及p-AKT/AKT比例增加(P＜0.05)。【结论】 卵巢颗粒细胞中miR-26a-5p通过直接靶向抑制PTEN基因的表达来活化AKT蛋白，激活PI3K/Akt信号通路，促进颗粒细胞增殖。

关键词：miR-26a-5p;PTEN基因')">PTEN基因;颗粒细胞增殖;PI3K/Akt信号通路

基金资助：江苏农林职业技术学院高层次人才引进项目(2024rc17)；国家自然科学青年基金项目(32102550)