绵羊瘤胃上皮细胞VTN基因启动子转录调控特性研究

来源：中国畜牧兽医杂志2025年第8期北京时间：

作者：钟秉潜, 苏比奴尔·艾力, 朱爱文, 孙岩, 王玉涛, 闫伟

单位：1. 喀什大学生命与地理科学学院, 新疆帕米尔高原生物资源与生态重点实验室, 喀什 844000;2. 江苏农牧科技职业学院动物科技学院, 泰州 225300

摘要：【目的】 探究绵羊瘤胃上皮细胞玻连蛋白(vitronectin，VTN)基因核心启动子的转录活性及转录因子CCCTC-结合因子(CCCTC-binding factor，CTCF)基因过表达对VTN等基因表达的影响。【方法】 通过在线生物信息学分析软件预测绵羊VTN基因启动子核心区域并设计6对启动子缺失片段引物，采集湖羊血液提取DNA，克隆VTN基因CDS区上游6个启动子缺失片段区域，构建荧光素酶重组质粒L1-basic、L2-basic、L3-basic、L4-basic、L5-basic及L6-basic，转染绵羊瘤胃上皮细胞，并以荧光素酶报告基因试验验证启动子活性区域位置。通过在线生物信息学分析软件预测转录因子CTCF与VTN基因启动子的结合位点，以绵羊瘤胃上皮细胞为材料，提取RNA后进行反转录，克隆绵羊CTCF基因CDS区，构建CTCF基因的过表达载体，与VTN基因启动子重组质粒L1-basic、L2-basic、L3-basic及L4-basic共转染绵羊瘤胃上皮细胞，以单独转染的重组质粒为对照组，通过荧光素酶报告基因试验验证以确定转录因子CTCF可能结合VTN基因启动子的核心区域；利用实时荧光定量PCR分析CTCF基因过表达转染组CTCF、VTN、C-MYC、GLUT1与SP1基因的表达情况。【结果】 试验成功构建绵羊VTN基因启动子区6个重组荧光素酶报告载体。生物信息学网站预测与荧光素酶报告基因试验结果显示，VTN基因核心启动子可能位于―933/―440 bp处，且转录因子CTCF可能与VTN基因启动子核心区域存在互作。CTCF基因过表达后，与对照组相比，VTN、C-MYC与GLUT1基因表达量显著降低(P＜0.05)，而SP1基因表达量则无显著变化(P＞0.05)。【结论】 绵羊瘤胃上皮细胞中转录因子CTCF可能主要结合VTN基因启动子的区域(―439/+26 bp)与核心区域(―933/―440 bp)影响VTN基因表达，且CTCF基因过表达影响VTN、C-MYC、GLUT1基因转录，提示CTCF基因潜在影响绵羊瘤胃上皮细胞生长增殖与物质代谢。

关键词：绵羊;VTN基因')">VTN基因;核心启动子;瘤胃上皮细胞;CTCF基因')">CTCF基因

基金资助：中国科学院“西部之光”人才培养计划项目(2018-XBQNXZ-A1-002)；喀什地区科技计划项目(ks2023021)