LC-MS结合网络药理学探讨紫锥菊抗猪流行性腹泻病毒的作用机制

来源：中国畜牧兽医杂志2025年第9期北京时间：

作者：毛驰文, 黄明凤, 李淼淼, 陈兰, 罗怡泓, 连凯琪, 马圣明, 朱二鹏

单位：1. 贵州大学动物科学学院, 贵阳 550025;2. 安阳工学院生物与食品工程学院, 安阳 455000

摘要：【目的】 采用液相色谱-质谱联用(liquid chromatograph mass spectrometer，LC-MS)和网络药理学探究紫锥菊(Echinacea purpurea，EP)抗猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus，PEDV)的活性成分、靶点及潜在作用机制，为进一步开发新型抗PEDV的治疗药物提供理论依据。【方法】 构建PEDV感染IPEC-J2细胞模型，利用不同浓度EP提取物处理细胞模型。采用实时荧光定量PCR检测PEDV N蛋白mRNA转录水平，并分析EP提取物对PEDV复制的影响；采用LC-MS对EP中的化学成分进行定性定量分析；利用TCMSP、SwissTargetPrediction、NCBI数据库检索EP药用活性成分与抗PEDV作用相关的分子靶点，取交集靶点输入STRING数据库构建蛋白相互作用(PPI)网络并筛选关键靶点；构建“EP-活性成分-交集靶点”网络，同时用DAVID数据库对交集靶点进行GO功能和KEGG通路富集分析，预测EP抗PEDV作用的核心成分、关键靶点及潜在机制。利用分子对接验证主要核心成分与关键靶点的结合能力。【结果】 体外试验结果表明，与对照组相比，EP提取物显著抑制了PEDV N蛋白mRNA转录水平(P＜0.05)。LC-MS检测发现，EP中含有甜菜碱、鞣花酸、菊苣酸等81种化学成分，分类占比最高的主要为酚类、萜类、黄酮类等。基于网络药理学筛选，EP中鞣花酸、(+)-儿茶素、苦参碱等18种药用活性成分可能作用于144个靶点发挥抗PEDV作用，重要核心成分有山奈酚、漆黄素、木犀草素等，关键靶点包括肿瘤蛋白p53(tumor protein 53，TP53)、白细胞介素-6(interleukin-6，IL-6)、类固醇受体辅激活因子(steroid receptor coactivator,SRC)、丝裂原活化蛋白激酶 1(mitogen-activated protein kinase 1，MAPK1)等，主要涉及Th17细胞分化、NOD样受体信号通路、FoxO信号通路等，参与细胞免疫、细胞凋亡、细胞周期等过程。分子对接结果显示，鞣花酸与TP53、IL-6、SRC、MAPK1结合能均＜－29.308 kJ/mol，且鞣花酸与MAPK1结合力最强。【结论】 本研究分析预测EP是基于多成分、多靶点、多途径的协同复杂作用，利用山柰酚、漆黄素、木犀草素等核心成分作用于TP53、IL-6、SRC、MAPK1等靶点，通过调控Th17细胞分化、NOD样受体、FoxO等信号通路发挥抗PEDV作用。

关键词：猪流行性腹泻病毒(PEDV);紫锥菊;液相色谱-质谱联用;网络药理学

基金资助：贵州省基础研究计划项目(黔科合基础-ZK[2022]一般158)；安阳工学院博士启动资金项目(BSJ2021007、BHJ2022009)