103种化疗药物对犬T细胞功能和毒性的评估

来源：中国畜牧兽医杂志2025年第9期北京时间：

作者：秦梦可, 李慧鑫, 李四豪, 张启超, 王荣军, 孟庆大, 谢闪闪

单位：1. 河南农业大学动物医学院, 郑州 450046;2. 河南农业大学动物医学院, 类器官培养研究中心, 郑州 450046;3. 郑州瑞派小俏皮动物医院, 郑州 450000;4. 郑州瑞隆宠物医院, 郑州 450000

摘要：【目的】 评估化疗药物对犬外周血来源T细胞γ-干扰素(interferon-γ，IFN-γ)分泌、抗肿瘤功能、增殖和杀伤毒性的影响，从而筛选对T细胞毒性和功能影响小的化疗药物，以便单独或联合其他免疫治疗药物用于犬肿瘤疾病的临床治疗。【方法】 采集健康犬外周血，通过密度梯度离心法分离得到犬外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells，PBMCs)，经体外培养扩增获取犬T细胞；采用流式细胞术分析扩增前后T细胞的比例；将103种肿瘤化疗药物以20 μmol/L的浓度作用于犬T细胞48 h，通过ELISA方法检测经药物作用后犬T细胞IFN-γ的释放水平；结合实验室前期研究数据选出具有抗肿瘤活性且对T细胞IFN-γ分泌影响较小的药物，以20 μmol/L的浓度预处理T细胞12 h后，通过结晶紫染色检测药物对T细胞抗肿瘤功能的影响，并通过细胞毒性试验和LDH试验评估所选化疗药物对T细胞的毒性作用。【结果】 本研究成功从犬外周血扩增得到纯度高达99.70%的T细胞。ELISA结果显示，多烯紫杉醇等14种药物(13.59%)能显著促进T细胞分泌IFN-γ(P＜0.05),鸦胆子苦醇等34种药物(33.01%)显著抑制T细胞IFN-γ的释放(P＜0.05)，C8-神经酰胺等55种药物(53.40%)对IFN-γ释放无显著影响(P＞0.05)。结合实验室前期研究数据，选出硫酸长春碱、C8-神经酰胺、2'-O-(2-甲氧基乙基)-胞苷和多烯紫杉醇等10种对T细胞IFN-γ分泌无抑制作用的抗犬乳腺肿瘤化疗药物。进一步研究发现，6-巯嘌呤、三水多烯紫杉醇和2'-O-(2-甲氧基乙基)-胞苷等药物对T细胞抗肿瘤功能无显著影响。其中2'-O-(2-甲氧基乙基)-胞苷对犬T细胞毒性较小，细胞增殖活力维持在85%以上，且未引起显著的细胞死亡。【结论】 硫酸长春碱、C8-神经酰胺、2'-O-(2-甲氧基乙基)-胞苷和多烯紫杉醇等化合物对犬T细胞毒性较小，其中2'-O-(2-甲氧基乙基)-胞苷对T细胞毒性小且对其功能未产生显著抑制作用，有望成为犬肿瘤化疗或联合疗法的优选药物。

关键词：肿瘤免疫;犬T细胞;化学治疗;联合治疗

基金资助：国家人社部高层次留学人才回国资助(109-23XM0447)；河南农业大学高层次人才支持专项(111-30501275、111-30501434)