双氢青蒿素体外抗猪繁殖与呼吸综合征病毒的作用研究

来源：中国畜牧兽医杂志2025年第9期北京时间：

作者：秦枫, 刘云, 唐楠楠, 吴植, 李勇军, 于生兰, 朱善元

单位：1. 江苏农牧科技职业学院, 江苏省兽用生物制药高技术研究重点实验室, 泰州 225300;2. 江苏农牧科技职业学院, 江苏中药科技园, 泰州 225300

摘要：【目的】 探讨双氢青蒿素(dihydroartemisinin,DHA)体外抗猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus，PRRSV)作用。【方法】 试验首先建立体外抗PRRSV的Marc-145细胞模型，采用MTT法检测DHA对Marc-145细胞毒性，确定其最大安全浓度。将Marc-145细胞分为4组，分别为空白对照组(Control)、阳性对照组(利巴韦林)、模型组(PRRSV)和药物组(DHA)，检测阻断、抑制和直接灭活作用方式下DHA抗PRRSV的作用效果。通过实时荧光定量PCR和Western blotting分别检测不同作用方式下、不同时间点PRRSV N的mRNA和蛋白表达量，利用Annexin/PI双染法检测PRRSV感染诱导的细胞凋亡情况。【结果】 DHA和阳性药物利巴韦林的最大安全浓度分别为3.13和15.63 μg/mL。在阻断、抑制和直接灭活作用下，DHA对PRRSV的的最大抑制率分别为66.2%、88.9%和62.1%；在抑制作用下细胞基本保持单层完好，在阻断和直接灭活作用下细胞出现了圆缩、团聚的现象。抑制作用下，利巴韦林对PRRSV的抑制率最大，抑制率为68.9%，细胞出现了圆缩、团聚的现象。实时荧光定量PCR检测结果显示，在阻断和抑制作用下，与模型组相比，利巴韦林和DHA组细胞中PRRSV N基因拷贝数显著降低(P＜0.05)；在直接灭活作用下，与模型组相比，DHA组细胞中PRRSV N基因拷贝数显著降低(P＜0.05)。Western blotting结果显示，不同作用方式下，与模型组相比，不同时间点DHA组细胞中PRRSV N蛋白表达量均显著降低(P＜0.05)。细胞凋亡检测结果显示，阻断作用下，与模型组相比，早期凋亡48 h时，DHA组细胞凋亡率显著降低(P＜0.05)；晚期凋亡不同时间点，利巴韦林和DHA组细胞凋亡率均显著降低(P＜0.05)。抑制作用下，与模型组相比，在早期凋亡和晚期凋亡72 h时，DHA组细胞凋亡率均显著降低(P＜0.05)。直接灭活作用下，与模型组相比，早期凋亡24、48 h时，DHA组细胞凋亡率显著降低(P＜0.05)；晚期凋亡24、72 h时，DHA组细胞凋亡率显著降低(P＜0.05)。【结论】 DHA体外抗PRRSV作用显著，主要通过抑制PRRSV N基因表达及N蛋白合成发挥作用，同时对细胞凋亡具有抑制效果。

关键词：双氢青蒿素(DHA);猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV);抗病毒作用;细胞凋亡

基金资助：江苏省高等学校基础科学(自然科学)研究重大项目(22KJA230003)；江苏农牧科技职业学院科技创新团队项目(NSF2024TC02)；江苏省2019年度高校优秀科技创新团队“动物疫病防控技术研究”项目(苏教科函[2019]7号)