鸡传染性法氏囊病病毒直接免疫荧光检测方法的建立及初步应用

来源：中国畜牧兽医杂志2025年第9期北京时间：

作者：姜艳平, 孙健, 刘薇, 李博龙, 白慧涛, 杨景, 李佳璇, 崔文, 周晗, 韩建春, 唐丽杰

单位：1. 黑龙江省绿色食品科学研究院, 哈尔滨 150028;2. 吉林省松原市农村公共事务服务中心, 松原 138000;3. 东北农业大学动物医学学院, 哈尔滨 150030

摘要：【目的】 利用R-藻红蛋白荧光素(R-PE)标记鸡传染性法氏囊病病毒(Infectious bursal disease virus，IBDV)单克隆抗体，建立快速检测组织和细胞中IBDV的直接免疫荧光方法。【方法】 试验取单克隆抗体细胞4C12复苏后，免疫小鼠制备单克隆抗体腹水，用层析柱进行纯化，通过间接免疫荧光法和ELISA方法对其进行鉴定，并测定抗体效价；通过偶联试剂盒对单克隆抗体进行标记，建立直接免疫荧光法并优化反应条件，检测其特异性、敏感性及稳定性。利用建立的方法对感染IBDV的鸡法氏囊和脾脏进行检测。【结果】 纯化的4C12单克隆抗体腹水效价为1∶108；用R-PE标记4C12单克隆抗体，成功建立了直接免疫荧光检测方法，确定最佳反应条件为：IBDV感染DT40细胞48 h、4%多聚甲醛和无水乙醇为固定剂进行双重固定、R-PE-4C12株单克隆抗体工作浓度为24 μg/mL、抗体孵育90 min，此条件下荧光效果最佳。建立的直接免疫荧光方法与禽白血病病毒(ALV)、禽网状内皮组织增生症病毒(REV)、禽脑脊髓炎病毒(AEV)和减蛋综合症病毒(EDSV)不发生交叉反应，特异性较好；该方法在病毒含量为103鸡胚半数感染量(ELD50)时仍能检测到阳性信号，灵敏性较好；稳定性试验显示，R-PE-4C12在4 ℃保存21 d后，仍能产生稳定的荧光信号。建立的直接免疫荧光方法中R-PE-4C12能与感染组织中IBDV结合产生特异性红色荧光；与间接免疫荧光法相比，两者荧光效果没有明显差异。【结论】 本研究建立的直接免疫荧光方法具有较好的特异性、敏感性和稳定性，可以用于组织和细胞中IBDV的检测，为实验室IBDV检测提供一种快速有效的检测方案。

关键词：鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV);直接免疫荧光法;单克隆抗体;R-藻红蛋白荧光素

基金资助：十四五国家重点研发项目子课题(2022YFD1800304-05)