猫疱疹病毒多表位纳米颗粒疫苗的制备及免疫原性评价

来源：中国畜牧兽医杂志2025年第9期北京时间：

作者：杨丹丹, 刘冰, 赵维昊, 赵亚楠, 张玉蝶, 郭巾玲, 刘冬禹, 殷玉和, 吴丛梅

单位：1. 长春工业大学化学与生命科学学院, 长春 130012;2. 吉林省五星物保健有限公司, 长春 130012

摘要：【目的】 设计并开发针对猫疱疹病毒1型(FHV-1)gB、gD蛋白的多表位纳米颗粒疫苗，为FHV-1多表位纳米颗粒疫苗的抗原筛选与优化提供理论依据。【方法】 本研究利用多种生物信息学工具对 FHV-1 gB、gD蛋白的理化性质、跨膜结构、N-糖基化位点、二级结构、B细胞抗原表位、免疫原性和保守性进行分析。构建重组质粒pET20b-FBDF,转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞进行诱导表达。经 Ni柱亲和层析纯化及透析浓缩处理后得到重组蛋白FBDF，通过 SDS-PAGE 进行鉴定，BCA 法测定蛋白含量，透射电子显微镜(TEM)和动态光散射(DLS)观察自组装纳米颗粒的形态和粒径大小。将制备的FHV-1表位纳米颗粒疫苗皮下免疫 BALB/c 小鼠，评价其免疫原性。【结果】 FHV-1 gB、gD蛋白的多个氨基酸域均表现出优异的亲水性、抗原性、结构柔韧性和表面可及性特征。FHV-1 gB、gD蛋白分别存在11和5个潜在的糖基化位点；蛋白二级结构均主要由α-螺旋、β-折叠、β-转角及无规则卷曲组成，其中无规则卷曲占比最高；分别产生17和6个B细胞线性表位。筛选出3个高抗原性和保守性的优势抗原表位：gB1：197－208，gB2:314－325，gD: 221－232。将表位使用柔性连接子(GGGGS)与 Ferritin 相连，经密码子优化后，构建 pET20b-FBDF重组质粒。SDS-PAGE结果显示，重组蛋白 FBDF 在 30 ℃、0.5 mmol/L IPTG 诱导16 h时成功可溶性表达。TEM和DLS结果显示，纯化后的 FBDF 蛋白可自组装成直径为16.55 nm 的纳米颗粒。小鼠免疫结果显示，三免后14 d小鼠血清中抗体滴度达到峰值，其中 FBDF＋Al(OH)3、FBDF＋CpG、FRCPV组抗体滴度分别为1∶680 000、1∶15 600、1∶3 500，显著高于PBS和 Ferritin 组(P＜0.05)。接种FBDF可诱导小鼠产生较高水平的γ-干扰素(IFN-γ)、白细胞介素-4(IL-4)和中和抗体，中和抗体水平最高可达 1∶25。【结论】 本研究构建的多表位纳米颗粒疫苗FBDF具有较好的免疫原性，可诱导BALB/c小鼠产生体液免疫和细胞免疫应答，为 FHV-1 多表位疫苗的研究奠定基础。

关键词：猫疱疹病毒(FHV);gB蛋白;gD蛋白;抗原表位预测;多表位疫苗

基金资助：吉林省科技发展计划项目(20200404195YY)