云南省G10P[11]基因型牛轮状病毒的分离鉴定及其遗传特征研究

来源：中国畜牧兽医杂志2025年第10期北京时间：

作者：黄洁, 朱沛, 李占鸿, 王金萍, 何于雯, 喻建荣, 徐心明, 沙丽东, 陈培富, 姚俊

单位：1. 云南农业大学动物医学院, 昆明 650201;2. 云南省畜牧兽医科学院, 云南省热带亚热带动物病毒病重点实验室, 昆明 650224;3. 云南省农业职业技术学院, 昆明 650212;4. 云南省楚雄州禄丰市动物疫病预防控制中心, 禄丰 651200;5. 昆明市富民县动物疫病预防控制中心, 富民 650400

摘要：【目的】A型牛轮状病毒(Bovine rotavirus，BRV)是引起新生犊牛严重肠炎的重要病原，试验旨在了解云南省规模化牛场BRV流行毒株的基因型及分子特征，为牛场病毒性腹泻防控提供理论依据。【方法】采用RT-PCR方法对云南某规模肉牛场7份西门塔尔犊牛腹泻粪便样品进行病原检测，取BRV核酸呈阳性的样品通过MA-104细胞系对病毒进行连续传代分离；利用间接免疫荧光试验(IFA)检测病毒增殖情况，绘制病毒生长曲线；进一步对分离毒株全基因组进行测序，利用在线比对软件进行基因组分型，利用Mega 7.0软件分别绘制VP4、VP7基因遗传进化树，使用GeneDoc软件分析氨基酸突变情况。【结果】7份腹泻样品检测均为BRV阳性，分离获得1株BRV毒株，命名为YNLL-2023，其基因型为G10-P[11]-I2-R2-C2-M2-A3-N2-T6-E2-H2。分离毒株感染MA-104细胞12 h出现明显的细胞病变效应(CPE)。RT-PCR扩增获得分离毒株VP6基因约300 bp的特征性片段；IFA显示分离毒株感染MA-104细胞后胞浆内出现特异性绿色荧光，生长曲线显示病毒滴度从接毒后6～54 h持续上升，达到峰值105.57 TCID50/100 μL。遗传进化分析表明，分离毒株VP4基因核苷酸序列与RVA/Yak-tc/CHN/HB-3/2021/G10P[11]株(登录号：ON711387.1)处于同一分支，VP7基因核苷酸序列与RVA/Bovine-wt/CHN/JS31/2020/G10株(登录号：PQ332932.1)和RVA/Bovine-wt/CHN/SD1/2023/G10株(登录号:PQ332943.1)处于同一分支。氨基酸序列分析显示，分离株VP4氨基酸序列与P[11]型羊源疫苗株在中和表位区域存在7个氨基酸位点突变，VP7氨基酸序列与G10型人-牛重组疫苗株在中和表位区域存在2个氨基酸位点突变。【结论】本试验通过MA-104细胞成功分离获得1株G10P[11]型BRV，该毒株与中国牛源多个毒株相似性较高，但与同基因型疫苗株的中和表位存在差异。

关键词：牛轮状病毒(BRV);G10P[11]基因型;生物学特性;遗传特征

基金资助：云南省科技厅乡村振兴科技专项(202304BI090003)；云南省科技厅重点研发计划(202303AK140031)；云南益民养殖示范基地有限公司姚俊专家基层科研工作站；澜沧重牧农业科技有限公司姚俊专家基层科研工作站