猪圆环病毒4型Cap蛋白的原核表达及多克隆抗体制备

来源：中国畜牧兽医杂志2025年第10期北京时间：

作者：文英会, 崔鸿博, 陈曦艋, 陈红英, 李金磊, 赵丽, 刘占通, 闫志浩

单位：1. 河南牧业经济学院动物医药学院, 郑州 450046;2. 河南农业大学动物医学院, 郑州 450002;3. 河南省农畜水产品检验技术研究院, 郑州 450008;4. 西峡县农业农村局, 西峡 474500

摘要：【目的】通过原核表达系统表达猪圆环病毒4型(Porcine circovirus type 4,PCV4)衣壳蛋白(Cap)，并制备其多克隆抗体，为PCV4的防控提供技术支撑。【方法】基于PCV4开放阅读框2(ORF2)基因的免疫原区域设计1对特异性引物，通过PCR扩增获得PCV4 ORF2基因序列，并将其连接至pET-28a(+)载体，构建重组表达质粒pET-28a-ORF2；将经PCR和测序鉴定正确的重组质粒pET-28a-ORF2转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞，经1 mmol/L IPTG诱导表达重组Cap蛋白，利用SDS-PAGE分析诱导的重组蛋白产物。利用尿素纯化重组Cap蛋白并通过Western blotting鉴定；将纯化的重组Cap蛋白免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体并进行Western blotting鉴定，应用间接ELISA法检测兔血清抗体效价。【结果】PCR扩增出大小为414 bp的PCV4 ORF2基因片段，成功构建重组表达质粒pET-28a-ORF2。SDS-PAGE分析结果显示，诱导表达的重组Cap蛋白大小为16 ku；Western blotting结果表明制备的兔源多克隆抗体具有良好的免疫原性。间接ELISA检测显示，制备的兔血清抗体效价达1∶12 800。【结论】本研究利用原核表达系统成功表达了PCV4 Cap蛋白并制备了多克隆抗体，试验结果为PCV4 Cap蛋白的深入研究以及后续开发PCV4基因工程亚单位疫苗、血清学诊断试剂等提供了物质基础。

关键词：猪圆环病毒4型(PCV4);Cap蛋白;原核表达;多克隆抗体

基金资助：河南省高校科技创新人才支持计划(21HASTIT039)；河南农业大学拔尖人才项目(30501277)；河南省科技攻关项目(242102110002)