FliC蛋白佐剂对伪狂犬病病毒Bartha-K61株弱毒疫苗的黏膜免疫作用

来源：中国畜牧兽医杂志2025年第10期北京时间：

作者：梁力荣, 柯海意, 臧莹安, 翟少伦, 康桦华, 蒋智勇, 李艳, 张昆丽, 周霞, 勾红潮, 李春玲

单位：1. 仲恺农业工程学院, 广州 510225;2. 广东省农业科学院动物卫生研究所, 广东省畜禽疫病防治研究重点实验室, 农业农村部兽用药物与诊断技术广东科学观测实验站, 广东省养猪与猪病防控技术研究企业重点实验室, 猪禽种业全国重点实验室, 广州 510640;3. 广东省高州农业学校, 茂名 525200

摘要：【目的】探讨FliC蛋白作为黏膜佐剂对伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus，PRV)Bartha-K61弱毒疫苗株的免疫增强作用，为PRV黏膜疫苗的研发奠定基础。【方法】将鼠伤寒沙门菌FliC基因克隆连接至原核表达载体pET-28a(+)，连接产物转化大肠杆菌Trans10感受态细胞，提取质粒后进行双酶切鉴定并测序；将FliC-pET-28a转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞，诱导表达FliC蛋白，通过考马斯亮蓝染色和Western blotting对纯化后的FliC蛋白进行鉴定。设置Bartha-K61病毒液组和商品化Bartha-K61疫苗组作为对照，将FliC蛋白作为黏膜佐剂与Bartha-K61病毒液混合，滴鼻2次免疫BALB/c小鼠，测定免疫前(0 d)、免疫后7、14、21、28和35 d小鼠血清IgG和IgA水平，免疫后第35天对各组小鼠分别滴鼻PRV GD-WH病毒液104.5 TCID50，攻毒后每日观察并记录小鼠生存状况。【结果】成功获得重组质粒FliC-pET-28a，实现了FliC蛋白的可溶性表达，纯化后的FliC蛋白大小约为58 ku。小鼠免疫试验结果显示，二免后Bartha-K61病毒液+FliC蛋白组血清IgG和IgA抗体均显著高于Bartha-K61病毒液组和商品化Bartha-K61疫苗组(P＜0.05)。攻毒保护试验结果显示，Bartha-K61病毒液+FliC蛋白免疫能给小鼠提供100%的保护力，抵抗PRV GD-WH的致死性攻击，具有高于Bartha-K61病毒液单独免疫的保护力。【结论】FliC蛋白佐剂对PRV Bartha-K61弱毒疫苗株具有黏膜免疫增强作用，并使小鼠获得一定的免疫保护效力。

关键词：FliC蛋白;伪狂犬病病毒弱毒疫苗;黏膜免疫

基金资助：广东省农业科学院协同创新中心项目(XTXM202202、XT202207)；猪禽种业全国重点实验室(2023QZ-NK13、GDNKY-ZQQZ-K25)；科技创新战略专项(高水平农科院建设)(R2021PY-QY006)；国家重点研发计划(2024YFD1800505)；地方猪种项目(2024-XBH-00-003)；省级现代农业产业体系创新团队建设项目(2024CXTD15)