猪流行性腹泻病毒S1蛋白的真核表达及中和性单克隆抗体制备

来源：中国畜牧兽医杂志2025年第10期北京时间：

作者：李春震, 李青梅, 邹婉莹, 孟泽锟, 孙亚宁, 杨苏珍, 郭军庆, 张改平

单位：1. 河南农业大学动物医学院, 国家动物免疫学国际联合研究中心, 郑州 450046;2. 河南省农业科学院动物疫病防控研究所(河南省农业科学院动物免疫学重点实验室), 郑州 450002;3. 龙湖现代免疫实验室, 郑州 450046;4. 江苏高校动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心, 扬州 225009

摘要：【目的】制备猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus，PEDV)S1重组蛋白及其中和性单克隆抗体,为PEDV诊断试剂和新型疫苗研发提供材料。【方法】构建可表达S1蛋白的重组质粒，转染HEK293F细胞，以镍亲和层析和凝胶过滤层析进行蛋白纯化。将PEDV CH/Hubei/2016毒株接种于Vero细胞进行培养增殖，对病毒液进行浓缩并利用凝胶过滤层析纯化PEDV，以SDS-PAGE及Western blotting对纯化的PEDV进行鉴定后免疫BALB/c小鼠以制备杂交瘤细胞；以间接ELISA及免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA)筛选阳性杂交瘤细胞，并通过病毒中和试验筛选鉴定抗PEDV S1蛋白中和性单克隆抗体。【结果】SDS-PAGE和Western blotting结果显示，S1重组蛋白在HEK293F细胞培养上清中高效表达。获得TCID50为1×10-6.5/0.1 mL纯化的PEDV。筛选获得5株稳定分泌抗PEDV S1重组蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株2E1E10、4A8C8、8G9B11、9H8H1和10C9A5，其腹水的IPMA和ELISA效价分别为6.4×10-4至1.28×10-5和6.4×10-5至1.024×10-7。病毒中和试验结果显示，单克隆抗体2E1E10和4A8C8对PEDV有显著中和活性，对DR13毒株的半数抑制浓度(IC50)分别为1.212和1.203 μg/mL，对CHHB毒株的IC50分别为0.948和1.712 μg/mL。【结论】本研究获得了具有良好抗原活性的PEDV S1重组蛋白和抗S1蛋白中和性单克隆抗体,为PEDV诊断试剂和疫苗研发奠定良好的研究基础。

关键词：猪流行性腹泻病毒(PEDV);S1蛋白;单克隆抗体;中和活性;广谱反应性

基金资助：河南省重点研发专项(231111113100)；河南省农业科学院科技创新团队(2024TD03)；河南省农业科学院基础性科研(2024JC16)