基于偶氮酪蛋白法研究饲料蛋白来源对饲料中蛋白酶活性测定的影响

来源：中国畜牧兽医杂志2025年第11期北京时间：

作者：矫松君, 刘学涛, 李铁钊, 赵峰, 王钰明, 侯嘉, 解竞静

单位：1. 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所, 畜禽营养与饲养全国重点实验室, 北京 100193;2. 杭州康德权饲料有限公司包膜饲料添加剂省级重点农业企业研究院, 杭州 311107

摘要：【目的】试验旨在优化偶氮酪蛋白法来测定蛋白酶活性，并探究不同蛋白质原料对饲粮中蛋白酶活性测定的影响。【方法】采用2×3两因素完全随机试验设计，研究pH对底物偶氮酪蛋白、酶解产物偶氮肽特征峰分布的影响，以确定偶氮肽的检测波长。采用单因素完全随机试验设计，分别研究不同浓度三氯乙酸(TCA)对偶氮酪蛋白的沉淀作用以及不同酶解反应时间对酶解反应速度的影响，并测定优化后的偶氮酪蛋白法的线性和精密度。采用2×3两因素完全随机试验设计，研究饲粮处理方法(10%、20%提取)和蛋白源(豆粕、花生粕、玉米蛋白粉)对蛋白酶酶促反应动力学的影响。【结果】偶氮酪蛋白底物和酶解产物的特征峰分布接近，当pH变为碱性时，偶氮酪蛋白底物和酶解产物特征峰由330～340 nm转移至415～425 nm。当TCA浓度为220.3和440.5 mg/mL时空白对照的吸光度值最低，440.5 mg/mL对偶氮酪蛋白沉淀效果最好。蛋白酶酶解速度随反应时间延长而降低，10和20 min时酶解速度与初始速度无显著差异(P＞0.05)，最适酶解反应时间为20 min。偶氮酪蛋白法在0.0016～0.1000 mg/mL蛋白酶测定中具有良好的线性关系(R2=0.993)，批内变异系数为1.59%～3.30%，批间变异系数为6.26%～13.12%。与空白对照组相比，10%饲粮提取液显著降低了蛋白酶酶促动力学最大反应速度(Vmax，P＜0.05)，但对米氏常数(Km)无显著影响(P＞0.05)；20%饲粮提取液显著降低了Vmax(P＜0.05)，并显著提高了Km(P＜0.05)；10%水平不同蛋白源对Vmax和Km均无显著影响(P＞0.05)。【结论】偶氮酪蛋白法测定蛋白酶活性具有灵敏度高、稳定性好的特点，可用于饲粮中蛋白酶活性测定。不同浓度饲粮提取液对蛋白酶酶促反应的抑制作用不同，但与饲粮蛋白质来源相关性较小。

关键词：蛋白酶活性;偶氮酪蛋白;饲粮蛋白;酶促动力学

基金资助：国家重点研发计划(2021YFD130030402)；现代农业产业体系北京家禽团队(BAIC06-2025-G04)；康德权企业横向合作项目(2021YF-15)