白术多糖抗猪繁殖与呼吸综合征病毒感染Marc-145细胞损伤的作用研究

来源：中国畜牧兽医杂志2025年第12期北京时间：

作者：孙伟翔, 朱平蔚, 刘涵月, 吴慧娴, 秦枫, 张力, 张乐, 周末, 吴植, 朱善元

单位：1. 江苏农牧科技职业学院, 泰州 225300;2. 江苏省兽用生物制药高技术研究重点实验室, 泰州 225300;3. 江苏现代畜牧与新兽药工程技术中心, 泰州 225300;4. 常州大学应用技术学院, 常州 213164;5. 南京中医药大学, 南京 210023

摘要：【目的】以非洲绿猴胚胎肾细胞(Marc-145)为模式细胞，研究白术多糖(Atractylodes macrocephala polysaccharides，AP)对猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus，PRRSV)感染Marc-145细胞所致损伤的保护作用及其机制。【方法】取生长至80%～90%融合度的Marc-145细胞用不同稀释度(10-1至10-10)的PRRSV感染，设空白对照组，继续培养后逐日记录各稀释度下产生细胞病变效应(CPE)孔数，待病变稳定后按Reed-Muench法计算病毒半数组织培养感染剂量(TCID50)。将Marc-145细胞以每孔不低于1×106/mL的密度接种于96孔细胞培养板中，用100 TICD50的PRRSV分别感染细胞0、12、24、48及96 h，于各时间点用显微镜随机拍照，观察细胞形态。将Marc-145细胞分为对照组和不同浓度AP组(200、400、800、1 600、3 200 和6 400 μg/mL),通过细胞毒性试验检测AP最适浓度范围；将Marc-145细胞分为对照组(Mock)、模型组(PRRSV)和给药组(不同浓度AP组(200、400、800 μg/mL)及1 μmol/mL利巴韦林组)，采用以下3种给药方式评估AP对PRRSV感染的影响：①感染前给药：分别用AP和利巴韦林孵育给药组细胞24 h后，给药组和模型组同时感染PRRSV 24 h；②感染同时给药：给药组分别用AP、利巴韦林与PRRSV孵育细胞24 h，模型组同时单独感染PRRSV 24 h；③感染后给药：给药组和模型组细胞同时感染PRRSV 24 h后，给药组分别给予AP和利巴韦林孵育24 h，模型组同时给予2% FBS DMEM孵育24 h，以上各处理组中，对照组均以2% FBS DMEM孵育细胞24 h作为对照，待处理结束后，各组细胞均换用2% FBS DMEM再培养48 h后检测。以上试验感染滴度为100 TCID50，利用半数组织培养感染剂量(TCID50)法检测AP对于PRRSV感染不同阶段滴度的影响，实时荧光定量PCR检测AP对于PRRSV感染不同阶段PRRSV ORF7基因相对表达量，利用比色法检测AP对于PRRSV感染不同阶段细胞的超氧化物歧化酶(SOD)活力、丙二醛(MDA)和谷胱甘肽(GSH)含量的影响，Western blotting法检测PRRSV感染细胞不同阶段N蛋白和Nrf2/HO-1通路蛋白的表达。【结果】由PRRSV感染后24 h的CPE孔数，按照Reed-Muench法计算PRRSV的滴度为10-6.6 TCID50/mL。与感染后0 h相比，PRRSV感染后24 h细胞出现聚集、团缩的现象，故该毒株最适感染细胞时间为24 h。AP孵育Marc-145细胞24 h时，与对照组相比，200～800 μg/mL AP组细胞活力显著提高(P＜0.05)，后续选用200～800 μg/mL AP 孵育细胞24 h作为试验最适条件。与模型组相比，AP能显著降低PRRSV内吞、吸附阶段中的病毒TCID50值、PRRSV ORF7基因相对表达量、MDA含量和PRRSV N蛋白表达量(P＜0.05)，显著提高细胞SOD活力和GSH含量(P＜0.05)并激活Nrf2/HO-1通路蛋白(P＜0.05)，但对于病毒胞内复制阶段中的上述指标无显著影响(P＞0.05)。【结论】本试验结果表明，200～800 μg/mL AP可通过激活Nrf2/HO-1通路抵抗PRRSV内吞、吸附阶段中对于细胞的氧化应激损伤作用。

关键词：白术多糖;猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV);Marc-145细胞;氧化应激

基金资助：江苏省高等学校基础科学(自然科学)研究重大项目(21KJA230001)；江苏省重点研发计划(现代农业)(BE2020407)；2023年江苏省高校协同创新中心项目(00000223001)；江苏省高等学校自然科学基金(23KJB230002)；泰州市科技支撑项目(农业)(TN202314)