表达DEC-205结合肽重组乳杆菌的构建及其对树突状细胞成熟的影响

来源：中国畜牧兽医杂志2025年第12期北京时间：

作者：郭双霖, 马孙婷, 谭飞, 张磊, 秦浩然, 陈蓉, 欧阳伟, 徐彬, 张纹纹, 杨蕾蕾, 袁厅, 朱枰潞, 冯志新, 熊祺琰, 郝飞, 谢星

单位：1. 南京农业大学动物医学院, 南京 210014;2. 江苏省农业科学院兽医研究所, 农业农业部兽用生物制品 工程技术重点实验室, 南京 210014;3. 启东市吕四港镇农业综合服务中心, 启东 226200

摘要：【目的】构建表达免疫原融合鸡DEC-205结合肽的重组神话猪联合乳杆菌(LigiLactobacillus saerimneri,L.sae)，探究其对鸡外周血树突状细胞(PB-MoDC)的影响。【方法】构建含组成型启动子HCE、增强子T7 g10、信号肽ssUSP及细胞壁锚定蛋白LPXTDG的乳酸菌表达质粒p612。插入Flag标签、鸡DEC-205短肽(DL(结合肽)/PS(对照肽))融合鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)VP2基因序列，构建重组质粒p612-VP2-PS、p612-VP2-DL。重组质粒经双酶切鉴定后，电转入神话猪联合乳杆菌M11，构建重组乳杆菌p612-VP2-PS/M11、p612-VP2-DL/M11。利用Western blotting及免疫电镜鉴定蛋白表达和分布情况；通过荧光显微镜观察未成熟PB-MoDC细胞对重组乳杆菌的吞噬效果；重组菌作用PB-MoDC细胞4 h后，利用实时荧光定量PCR检测细胞表面标志物(MHC-Ⅱ、CD40、CD80、CD83、DEC-205)及炎性因子(IFN-γ、IL-1β、IL-12、IL-6、TNF-α、CXCLi1)的转录水平。【结果】试验成功获得了携带空载体p612、重组质粒p612-VP2-DL(表达VP2和结合肽)和p612-VP2-PS(表达VP2和对照肽)的神话猪联合乳杆菌M11。Western blotting结果显示，重组乳杆菌p612-VP2-PS/M11、p612-VP2-DL/M11菌体沉淀中均可检测到目的蛋白表达；免疫电镜观察显示，重组蛋白主要分布在胞质及细胞壁内壁；重组菌可被未成熟的PB-MoDC细胞吞噬。与p612-VP2-PS/M11组相比，p612-VP2-DL/M11组PB-MoDC细胞中的MHC-Ⅱ、CD80、CD40、CD83、IL-1β、IL-12、IFN-γ、CXCLi1基因转录水平显著或极显著上调(P＜0.05；P＜0.01)；两组间PB-MoDC细胞中DEC-205、IL-6、TNF-α基因转录水平无显著差异(P＞0.05)。【结论】本研究成功构建了表面表达免疫原融合鸡DEC-205结合肽的重组鸡肠道乳杆菌，其能有效刺激PB-MoDC细胞成熟。试验结果为研发畜禽疫苗的新型靶向递送策略提供了理论依据。

关键词：DEC-205结合肽;神话猪联合乳杆菌;鸡外周血树突状细胞;表面标志物;炎性因子

基金资助：国家自然科学基金资助项目(32302909、32072872、32002291)；江苏省科协青年科技人才托举工程项目(JSTJ-2023-093)；江苏省农业科技自主创新资金项目(CX(24)2005)