抗A群猪轮状病毒VP7蛋白208—222aa结构域单克隆抗体的制备

来源：中国畜牧兽医杂志2025年第12期北京时间：

作者：刘博, 叶乐添, 康桦华, 贾晗铎, 李春玲, 周霞, 李艳, 蒋智勇, 勾红潮, 楚品品, 卞志标, 臧莹安, 翟少伦

单位：1. 仲恺农业工程学院动物科技学院, 广州 510225;2. 广东省农业科学院动物卫生研究所, 广东省畜禽疫病防治 研究重点实验室, 农业农村部兽用药物与诊断技术广东科学观测实验站, 广州 510640

摘要：【目的】制备抗A群猪轮状病毒(Porcine rotavirus,PoRV)VP7蛋白第208—222位氨基酸处(208—222aa)结构域单克隆抗体，并探究其免疫原性，为建立A群PoRV检测方法提供参考。【方法】利用AlphaFold3软件预测4种主要流行G基因型(G3、G4、G5和G9)PoRV VP7蛋白三聚体结构，对其208—222aa区域的特征性抗原表位进行比对和拟合。设计截短VP7蛋白，并分别与GST、MBP标签融合。通过原核表达系统分别表达重组蛋白GST-VP7和MBP-VP7，利用亲和层析纯化重组蛋白。利用纯化的MBP-VP7重组蛋白免疫小鼠，制备杂交瘤细胞株，采用人工合成208—222aa多肽进行筛选，获得特异性分泌抗体的细胞株。【结果】208—222aa区域结构分析显示，该结构域在不同基因型PoRV VP7蛋白中具有较高的构象保守性。通过原核表达系统，成功获得高纯度可溶性表达的重组蛋白GST-VP7和MBP-VP7。通过208—222aa多肽筛选，获得2株可分泌针对该结构域特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株：10F11G和5F6B。间接免疫荧光检测显示，10F11G和5F6B抗体可有效识别天然PoRV颗粒。【结论】本研究成功获得了2株可稳定分泌针对PoRV VP7蛋白208—222aa结构域特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株。试验结果为A群PoRV相关抗体制备和检测方法开发提供了基础材料。

关键词：A群猪轮状病毒;VP7蛋白;单克隆抗体;杂交瘤细胞;原核表达

基金资助：广东省农业科学院科技创新战略(农业科研主力军建设)专项(R2023PY-JG019)；广东省重点研发项目(2023B0202150001)