布鲁氏菌热休克蛋白GroEL基因缺失及过表达菌株的构建及生长特性鉴定

来源：中国畜牧兽医杂志2025年第12期北京时间：

作者：张瑜瑜, 张粟子, 李娜, 牟雪梅, 支飞杰, 冉多良, 储岳峰, 李斌, 许健

单位：1. 新疆农业大学动物医学学院, 乌鲁木齐 830052;2. 中国农业科学院兰州兽医研究所, 兰州大学动物医学与 生物安全学院, 动物疫病防控全国重点实验室, 兰州 730046;3. 甘肃省病原生物学基础学科研究中心, 兰州 730046

摘要：【目的】探究热休克蛋白GroEL对布鲁氏菌体外生长的影响及其在巨噬细胞定位情况，为研究GroEL基因的生物学功能奠定基础。【方法】采用同源重组及SacB反向筛选技术，以牛种布鲁氏菌(Brucella abortus)A19株为研究对象，构建牛种布鲁氏菌A19株GroEL基因缺失株(A19ΔGroEL)和过表达株(A19-HA/GroEL)；绘制GroEL基因缺失菌株及过表达菌株的体外生长曲线，检测GroEL对布鲁氏菌体外生长的影响，采用间接免疫荧光试验检测GroEL在RAW264.7巨噬细胞中的定位，并通过免疫电镜观察GroEL在布鲁氏菌中定位。【结果】PCR结果显示，扩增出了大小为1 520 bp的特异性条带，表明GroEL基因缺失株A19ΔGroEL构建成功。Western blotting结果显示，获得了大小为60.2 ku的目的条带，表明过表达株A19-HA/GroEL构建成功。细菌生长曲线结果显示，牛种布鲁氏菌A19、A19ΔGroEL和A19-HA/GroEL的体外生长趋势无显著差异(P＞0.05)。间接免疫荧光试验结果显示，GroEL主要定位于RAW264.7巨噬细胞的胞质中。免疫电镜观察结果显示，GroEL主要定位于布鲁氏菌的外膜和内膜。【结论】本研究成功构建了布鲁氏菌GroEL基因缺失株和过表达株，揭示了GroEL基因的缺失不影响布鲁氏菌的体外生长，且GroEL主要定位于RAW264.7巨噬细胞的细胞质和布鲁氏菌的外膜和内膜，为深入探究GroEL的生物学功能提供了理论基础和数据支持。

关键词：布鲁氏菌;热休克蛋白;GroEL基因')">GroEL基因;缺失株;过表达株

基金资助：中国农业科学院青年创新专项(Y2022QC27)；甘肃省科技创新人才计划(24RCKA002)；甘肃省自然基金重点项目(23JRRA560)；中国农业科学院创新工程项目(CAAS-ASTIP-2021-LVRI)