HMOX1基因;前脂肪细胞;增殖">
《中国畜牧兽医杂志》发表论文赏析
作者:杨平远, 殴小嫚, 殴正淼, 陈粉粉
单位:西南林业大学生物与食品工程学院,昆明 650224
摘要:目的 构建无量山乌骨鸡血红素加氧酶1(heme oxygenase 1,HMOX1)基因过表达载体,并转染鸡原代前脂肪细胞,探究过表达HMOX1基因对鸡原代前脂肪细胞增殖的影响。 方法 取1日龄无量山乌骨鸡雏鸡皮下脂肪组织,提取总RNA并反转录成cDNA,扩增HMOX1基因CDS区,使用质粒pcDNA3.1-mRFP构建过表达载体pcDNA3.1-HMOX1-mRFP,并进行酶切和测序鉴定;通过转染试剂将pcDNA3.1-HMOX1过表达载体转染鸡原代前脂肪细胞中并检测过表达效率;利用CCK-8法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞周期;利用实时荧光定量PCR和Western blotting检测增殖相关基因P21、CDK1、PCNA mRNA和蛋白表达量。 结果 酶切和测序结果表明,pcDNA3.1-HMOX1-mRFP过表达载体构建成功。实时荧光定量PCR和Western blotting检测结果显示,与对照组相比,转染pcDNA3.1-HMOX1-mRFP后细胞中HMOX1基因mRNA和蛋白表达量均极显著上调(P0.05);过表达HMOX1组细胞中PCNA基因mRNA和蛋白表达量均显著低于对照组(P<0.05)。 结论 本研究成功构建HMOX1基因过表达载体,转染无量山乌骨鸡原代前脂肪细胞后抑制了细胞增殖。试验结果可为进一步研究HMOX1对无量山乌骨鸡原代前脂肪细胞的分化作用提供理论指导。
关键词:无量山乌骨鸡;HMOX1基因')">HMOX1基因;前脂肪细胞;增殖
基金资助:国家自然科学基金项目(32060739)