鸡DDX21蛋白表达、多克隆抗体制备与应用

来源：中国畜牧兽医杂志2026年第2期北京时间：

作者：王梦迪, 张淼湘, 曾玉冰, 梁燕娇, 黄腾, 黄鉴妮

单位：1.广西大学动物科学技术学院，南宁 5300042.广西畜禽繁育与疾病防控重点实验室，南宁 5300043.广西壮族自治区兽用生物制品工程研究中心，南宁 530004

摘要：目的 研究鸡DDX21 RNA解旋酶的结构与功能，探索其是否参与H9N2亚型禽流感病毒（AIV）诱导的天然免疫反应。 方法 本研究扩增并克隆了鸡DDX21基因，通过生物信息学方法分析其基因序列；利用大肠杆菌表达系统通过IPTG诱导表达鸡DDX21重组蛋白；以纯化的重组蛋白为免疫原，制备鸡DDX21多克隆抗体，采用间接ELISA检测抗体的血清效价；应用Western blotting方法检测多克隆抗体与内源性鸡DDX21蛋白的反应情况。 结果 PCR扩增的鸡DDX21基因编码区序列为2 145 bp，编码714个氨基酸；克隆至pMD18-T载体的鸡DDX21基因经测序后的核酸序列与GenBank数据库公布的预测序列（登录号：XM_040675361.2）一致；鸡DDX21与鸟类进化关系较近，氨基酸序列相似性为68.8%~89.7%，属于禽类分支；鸡DDX21蛋白包含高度保守的DEXDc、HELICc和GUCT结构域，其蛋白三级结构与人DDX21蛋白结构模型相似性为82.71%。纯化后的鸡DDX21重组蛋白大小为101 ku，与预期相符；制备的兔抗鸡DDX21抗体血清效价达到1∶320 000，且该多克隆抗体能识别内源性鸡DDX21蛋白。鸡DDX21蛋白在H9N2亚型AIV感染鸡的多个组织中表达量上调，表明病毒感染增强鸡DDX21蛋白的表达。 结论 本研究成功克隆并分析了鸡DDX21的基因序列，制备的兔抗鸡DDX21多克隆抗体能识别内源性蛋白，为后续深入研究鸡DDX21蛋白调控Ⅰ型干扰素信号通路的分子机制奠定了基础。

关键词：鸡;DDX21基因')">DDX21基因;序列分析;多克隆抗体

基金资助：广西自然科学青年基金项目(2023GXNSFBA026293);广西科技重大专项(桂科AA24263033);国家自然科学基金项目(32202846)