鸭短喙矮小综合征病毒单克隆抗体制备及竞争ELISA检测方法的建立

来源：中国畜牧兽医杂志2026年第2期北京时间：

作者：朱小丽, 王劭, 董慧, 程晓霞, 江丹丹, 肖世峰, 陈少莺, 陈仕龙

单位：1.福建省农业科学院畜牧兽医研究所，福州 3500132.福建省畜禽疫病防治工程技术研究中心，福州 350013

摘要：目的 建立一种快速检测鸭短喙矮小综合征病毒（Short beak and dwarfism syndrome virus，SBDSV）抗体的血清学方法，为SBDSV抗体检测及诊断试剂盒研发提供技术支撑。 方法 本研究用纯化的SBDSV M15株灭活毒免疫BALB/c小鼠，取免疫小鼠脾细胞和骨髓瘤细胞（SP2/0）进行融合，利用间接ELISA筛选可分泌SBDSV单克隆抗体的杂交瘤细胞株。用筛选出的杂交瘤细胞接种小鼠制备腹水。通过间接ELISA测定单克隆抗体效价，通过间接免疫荧光试验（indirect immunofluorescence assay，IFA）和胶乳凝集（latex particle agglutination，LPA）试验鉴定单克隆抗体特性。通过中和试验测定单克隆抗体中和活性，使用试剂盒鉴定单克隆抗体亚类。运用棋盘滴定法优化反应体系，建立基于SBDSV单克隆抗体的竞争ELISA检测方法。通过检测阴性血清确定该方法的临界值。对建立的竞争ELISA检测方法进行特异性、灵敏性和重复性测定。用该方法检测临床血清样品，并与胶乳凝集抑制（latex particle agglutination inhibition，LPAI）试验结果进行比对。 结果 经间接ELISA筛选，获得3株稳定分泌SBDSV单克隆抗体的杂交瘤细胞，分别命名为D5-3、G11-23和H2-27。间接ELISA结果显示，3株杂交瘤细胞D5-3、G11-23和H2-27培养上清的抗体效价分别为1∶26、1∶25和1∶26，腹水的抗体效价分别为1∶105、1∶104和1∶106。IFA结果显示，单克隆抗体D5-3、G11-23和H2-27均具有较好的结合活性，可用于IFA检测。LPA试验结果显示，仅单克隆抗体H2-27具有致敏胶乳的特性。中和试验结果显示，3株单克隆抗体均具有中和SBDSV的能力，其中单克隆抗体H2-27的中和活性最强。单克隆抗体亚类鉴定结果显示，单克隆抗体D5-3和G11-23均为IgG1，H2-27为IgM。以纯化的SBDSV（M15株）灭活毒作为包被抗原，单克隆抗体H2-27为竞争抗体，建立了一种检测SBDSV抗体的竞争ELISA方法，当抑制率（PI）≥23.70%时，判定为SBDSV抗体阳性；PI≤15.91%时判定为阴性。该方法特异性好，与番鸭细小病毒（Muscovy duck parvovirus，MDPV）、番鸭呼肠孤病毒（Muscovy duck reovirus，MDRV）、鸭源副黏病毒（Duck paramyxovirus，DPMV）、鸭肝炎病毒1型（Duck hepatitis virus-1，DHV-1）和鸭坦布苏病毒（Duck Tembusu virus，DTMUV）阳性血清均无交叉反应；敏感性高，高免血清（LPAI效价1∶28）1∶25 600稀释时仍为阳性；批间、批内重复性好，变异系数均<6%。竞争ELISA检测结果与LPAI结果具有良好的正相关性，二者的符合率为89.10%（188/211）。 结论 本研究成功制备3株SBDSV单克隆抗体，基于单克隆抗体H2-27建立的竞争ELISA方法特异性强、灵敏度高、重复性好，可高通量检测SBDSV抗体，为监测SBDSV在中国的流行情况及雏鸭母源抗体水平评价提供技术支撑。

关键词：鸭;短喙矮小综合征病毒（SBDSV）;单克隆抗体;竞争ELISA

基金资助：福建省属公益类科研院所基本科研专项(2022R1026006);福建省属公益类科研院所基本科研专项(2016R1022-5);福建省家禽产业技术体系建设项目（2024-2025）;福建省农业科学院对外合作项目(DWHZ2024-05);国家自然科学基金项目(32302868)