克柔念珠菌诱导奶牛乳腺上皮细胞lncRNA差异表达分析

来源：中国畜牧兽医杂志2026年第3期北京时间：

作者：辛杰, 丁涛, 苗宇航, 马文妍, 杜军

单位：1.宁夏大学生命科学学院，银川 7500212.宁夏大学西部特色生物资源保护与利用教育部重点实验室，银川 750021

摘要：目的 长链非编码RNAs（lncRNAs）在宿主固有免疫应答中具有重要调控作用，但其在克柔念珠菌（Candida krusei）感染奶牛乳腺上皮细胞系（MAC-T）中的表达模式尚未明确。本研究旨在解析克柔念珠菌感染MAC-T后差异表达lncRNA（DElncRNA）的特征及功能，筛选潜在生物标志物并探索其参与的免疫调控通路。 方法 将MAC-T分为空白对照组（仅用DMEM 培养基常规培养）与克柔念珠菌ATCC 6258感染组（以感染复数（MOI）＝1的克柔念珠菌ATCC 6258与细胞共培养），每组均设3个生物学重复；采用转录组测序（RNA-Seq）技术分析两组细胞的lncRNA表达谱，结合生物信息学方法筛选DElncRNA，通过TargetScan、miRanda软件预测靶基因，并对其进行GO功能与 KEGG通路富集分析；采用ELISA法检测两组细胞上清中白细胞介素-1β（IL-1β）、IL-18、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、IL-4及IL-6的表达水平，验证炎症模型构建效果；选取10个DElncRNAs通过实时荧光定量PCR验证转录组测序结果可靠性。 结果 测序共检测到3 425个lncRNAs，其中与空白对照组相比，感染组筛选出55个显著上调、79个显著下调的DElncRNAs。GO功能富集分析显示，槲皮素能在细胞外空间、胞外区等部位通过参与炎症反应的正调控、IL-6产生的正调控等生物进程发挥作用。KEGG通路富集分析预测结果显示，DElncRNA的潜在靶基因可能涉及67条信号通路，其中显著富集于PI3K-Akt、NF-κB、MAPK等炎症相关信号通路及铁死亡通路。实时荧光定量PCR检测结果与转录组测序数据中的基因表达量变化趋势一致，其中，显著上调的lncRNA MSTRG.11194通过靶向WDR74、SLC3A2基因参与调控细胞的炎症反应和铁死亡。 结论 本研究在MAC-T中鉴定出134个与克柔念珠菌感染相关的DElncRNAs，可能通过靶向调控免疫信号通路参与奶牛乳腺上皮细胞的炎症反应和铁死亡，为阐明lncRNA调控克柔念珠菌诱导奶牛乳腺炎的机制及开发新型分子标志物提供了理论依据。

关键词：克柔念珠菌;奶牛乳腺上皮细胞;lncRNA;生物信息学分析;差异表达

基金资助：宁夏自然科学基金(2024AAC03118);国家自然科学基金(32160044)