抗球虫病枯草芽孢杆菌活载体口服疫苗ET seven的构建与鉴定

来源：中国畜牧兽医杂志2026年第3期北京时间：

作者：卢俊营, 倪君丽, 代倩倩, 陈祥杰, 蔡海明, 宋勇乐, 林栩慧, 吕敏娜, 张小慧, 李娟, 廖申权, 戚南山, 孙铭飞, 张健騑, 朱易斌, 胡倩倩

单位：1.安徽科技学院动物科学学院，凤阳 2331002.广东省农业科学院动物卫生研究所，农业农村部禽流感等家禽重大疾病防控重点实验室，广东省畜禽疫病防治研究重点实验室，广州 510640

摘要：目的 构建柔嫩艾美耳球虫EtAMA1-EtAMA2-EtMIC3-EtMIC4-EtMIC13-EtROP5-EtSAG1 7抗原表位的ET seven重组枯草芽孢杆菌表达质粒，并验证其在枯草芽孢杆菌中蛋白表达及其展示部位，为研发新型口服球虫疫苗提供研究思路。 方法 利用ET seven真核表达质粒和枯草芽孢杆菌基因组DNA，分别扩增ET seven基因和芽孢衣壳蛋白编码基因CotB，通过同源重组技术与载体pDG364融合，构建整合型重组质粒pDG364-CotB-ET seven，并将该重组质粒电转化枯草芽孢杆菌WB800N感受态细胞。通过Western blotting和间接免疫荧光方法检测ET seven融合蛋白的表达。利用重组枯草芽孢杆菌芽孢免疫麻黄鸡，间接ELISA检测鸡血清中特异性IgG抗体水平，通过攻虫试验评估免疫保护效果。 结果 PCR扩增获得大小分别为1 761和1 124 bp的ET seven和CotB基因。成功构建整合型重组质粒pDG364-CotB-ET seven并转入枯草芽孢杆菌WB800N感受态细胞内，获得能稳定遗传的重组枯草芽孢杆菌WB800N-CotB-ET seven。Western blotting结果显示，重组枯草芽孢杆菌WB800N-CotB-ET seven在90.6 ku处有特异性条带，ET seven蛋白的高免血清可特异性结合融合表达蛋白，确定融合蛋白正确表达。间接免疫荧光检测结果显示，在芽孢上检测到特异性荧光信号。ELISA检测结果显示，免疫鸡血清中特异性IgG抗体在二次免疫后呈高抗体水平阳性。攻虫试验结果显示，与攻虫对照组相比，免疫重组枯草芽孢杆菌芽孢组鸡每克粪便卵囊数显著下降（P<0.05）。 结论 本研究成功构建了表面展示ET seven融合蛋白的重组枯草芽孢杆菌，该重组芽孢具有良好的免疫原性，并能诱导产生特异性免疫保护，为开发新型抗球虫口服疫苗奠定基础。

关键词：柔嫩艾美耳球虫;口服疫苗ETseven;枯草芽孢杆菌;芽孢表面展示

基金资助：国家重点研发计划项目(2023YFD1802400);广东省重点领域研发计划项目(2023B0202150001);第四轮广东省现代农业产业技术体系创新团队建设项目(2024CXTD15);广东省农业科学院协同创新中心项目(XTXM202202);安徽省教育厅重点项目(KJ2019A0801)