绵羊RARα慢病毒过表达载体构建及其对绵羊成肌细胞增殖的影响

来源：中国畜牧兽医杂志2026年第3期北京时间：

作者：薛若楠, 刘世杰, 赵彬彬, 曹果清, 梁琳

单位：1.山西农业大学动物科学学院，太谷 0308012.畜禽遗传资源发掘与精准育种山西省重点实验室，太谷 030801

摘要：目的 视黄酸受体α（retinoic acid receptor alpha，RARα）在肌细胞增殖和分化进程中发挥着重要的作用。本研究旨在构建绵羊RARα慢病毒表达载体，并研究RARα基因在绵羊成肌细胞增殖过程中的调控作用。 方法 通过NCBI数据库获取绵羊RARα基因CDS序列（登录号：XM_004012862.6），采用基因合成方法插入到慢病毒转移载体（pCDH-CMV）克隆区，经PCR扩增及测序鉴定后，利用脂质体转染法将RARα慢病毒质粒转染人胚肾细胞（HEK 293FT），采用绿色荧光蛋白（GFP）、实时荧光定量PCR和Western blotting方法检测RARα基因和蛋白的表达水平；通过超速离心法收集RARα重组慢病毒颗粒，并感染绵羊成肌细胞，采用实时荧光定量PCR和Western blotting方法检测RARα、细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子1A（p21）、增殖细胞核抗原（PCNA）、周期蛋白依赖性激酶4（CDK4）和视黄酸受体相关孤儿受体（RORα）的表达情况，并通过细胞划痕和EdU检测分析RARα基因过表达对绵羊成肌细胞增殖的影响。 结果 绵羊RARα基因CDS序列成功插入pCDH-CMV克隆区，且RARα基因在HEK 293FT细胞中高表达。RARα重组慢病毒颗粒转染绵羊成肌细胞后，与对照组相比，RARα基因及其下游靶基因p21的表达量显著或极显著增加（P<0.05；P<0.01），且过表达RARα能够通过调控PCNA和CDK4的表达量极显著抑制成肌细胞增殖（P<0.01）。RARα负调控RORα基因表达，提示二者在绵羊成肌细胞增殖过程中可能存在颉颃关系。 结论 本研究构建的RARα慢病毒表达载体感染绵羊成肌细胞后，能够通过降低PCNA和CDK4的表达量抑制细胞增殖，同时对RORα基因表达有显著抑制作用。本研究结果可为了解RARα基因在绵羊成肌细胞增殖过程中的分子机制提供依据。

关键词：绵羊;RARα基因')">RARα基因;慢病毒;载体构建;成肌细胞增殖

基金资助：山西省基础研究计划(202403021222120);山西农业大学博士科研启动项目(2022BQ23);山西省博士毕业生、博士后研究人员来晋工作奖励经费科研项目(SXBYKY2022003)