牦牛支气管上皮细胞的分离鉴定、生长特性及多杀性巴氏杆菌侵染机制研究

来源：中国畜牧兽医杂志2026年第4期北京时间：

作者：郭万红, 刘博华, 赵兰硕, 张瑞, 胡剑武, 马有龙, 李腊, 赵轩阅, 牛家强, 徐业芬

单位：1.西藏农牧大学动物科学学院，林芝 8600002.西藏农牧大学，农业农村部西藏包虫病防治重点实验室（部省共建），林芝 8600003.西藏自治区农业农村厅，拉萨 850000

摘要：目的 探究高原环境下牦牛支气管上皮细胞与多杀性巴氏杆菌的互作机制，并揭示多杀性巴氏杆菌的侵染机制及其所致宿主细胞的病理损伤。 方法 采用组织贴壁法建立牦牛原代支气管上皮细胞体外培养体系，通过免疫荧光技术进行细胞鉴定，利用CCK-8法、台盼蓝染色及流式细胞术分析细胞生长特性；采用多杀性巴氏杆菌Pm XZ01菌株进行体外侵染试验，观察其对细胞形态及凋亡的影响。 结果 试验成功分离培养牦牛支气管上皮细胞，经免疫荧光鉴定显示细胞膜特异性表达角蛋白18。CCK-8法检测显示，细胞生长曲线呈典型S型，2~5 d为快速增殖期，6 d后进入平稳期。台盼蓝染色测得细胞存活率达94.52%。流式细胞术分析显示，原代细胞G1、S、G2期占比分别为52.19%、16.13%和31.68%，多数细胞处于静息状态。以1.0×107 CFU/mL Pm XZ01菌液侵染细胞，感染4 h时细胞贴壁良好、形态正常；感染6 h时出现少量死亡；感染16 h时细胞变圆、脱落或聚集，故4 h为最佳侵染时间。流式细胞术检测显示，侵染组细胞凋亡率（38.43%）极显著高于未侵染组（27.90%）（P<0.01），提示该菌可影响凋亡破坏宿主细胞。 结论 本研究采用组织贴壁法成功建立了牦牛支气管上皮细胞体外培养体系；多杀性巴氏杆菌Pm XZ01菌株可导致牦牛支气管上皮细胞形态损伤并诱导细胞凋亡。

关键词：牦牛;多杀性巴氏杆菌;支气管上皮细胞;侵染;细胞凋亡

基金资助：西藏自治区基层农技推广体系示范基地建设项目(XZNYSFJD202509);西藏自治区科技厅重点项目(XZ202001ZY0044N);西藏农牧大学大学生创新创业训练计划项目(2024-12);西藏自治区科技厅区域科技协同创新专项(QYXTZX-NQ2022-04)