猫杯状病毒VP1蛋白主要抗原表位区的原核表达及其多克隆抗体制备

来源：中国畜牧兽医杂志2026年第4期北京时间：

作者：郭兴扬, 张世龙, 王奂淇, 孙东波, 秦彤

单位：1.黑龙江八一农垦大学动物科技学院，大庆 1633192.中国农业科学院北京畜牧兽医研究所，北京 100193

摘要：目的 建立猫杯状病毒（Feline calicivirus，FCV）衣壳蛋白VP1主要抗原表位区（C~F）的原核表达系统，并制备其特异性多克隆抗体。 方法 通过同源重组技术将FCV VP1蛋白的主要抗原表位区克隆至原核表达载体pCold-TF中，构建重组质粒pCold-TF-FCV-VP1。将重组质粒转化大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞，经IPTG诱导表达重组蛋白。利用镍柱亲和层析对表达蛋白进行纯化，并通过SDS-PAGE与Western blotting检测蛋白纯度及免疫反应性。采用纯化后的蛋白免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体。用间接ELISA检测多克隆抗体效价，用Western blotting和间接免疫荧光试验（IFA）检测抗体特异性和反应性。 结果 成功构建了pCold-TF-FCV-VP1重组质粒，在16 ℃、0.5 mmol/L IPTG条件下诱导20 h蛋白表达量较高。表达的重组蛋白分子质量为82 ku，并以可溶性形式存在。间接ELISA结果显示，多克隆抗体效价可达1∶256 000，进一步通过Western blotting和IFA试验验证所制备的兔源多克隆抗体，其能特异性识别VP1蛋白，显示出良好的免疫原性与特异性。 结论 本研究成功制备了FCV VP1蛋白主要抗原表位区（C~F）的多克隆抗体，为后续深入探究FCV VP1蛋白的生物学功能，以及开发针对FCV的诊断方法提供了生物材料与理论依据。

关键词：猫杯状病毒（FCV）;VP1蛋白;抗原表位区;原核表达;多克隆抗体

基金资助：国家重点研发计划课题(2025YFD1800401)