马立克氏病病毒US3蛋白单克隆抗体的制备及应用

来源：中国畜牧兽医杂志2026年第4期北京时间：

作者：甄虹月, 步卫东, 程晶, 曹梦瑶, 蔺秋慧, 郭嘉辉, 李永清, 邢明伟, 江波

单位：1.东北林业大学野生动物与自然保护地学院，哈尔滨 1500402.北京市农林科学院畜牧兽医研究所，北京 1000973.河南省项城市农业农村局，周口 4662004.河南师范大学生命科学学院，新乡 453007

摘要：目的 为探究马立克氏病病毒（Marek’s disease virus，MDV）US3蛋白功能，本研究制备MDV US3蛋白单克隆抗体并对其特异性进行鉴定，同时基于此建立直接免疫荧光试验检测方法，为MDV的快速检测提供技术支持。 方法 将MDV US3基因克隆至pFastBac1质粒，构建重组质粒pFastBac1-US3，转化大肠杆菌DH10Bac感受态细胞，经筛选鉴定并扩大培养后，提取重组杆粒rBacmid-US3。随后转染至昆虫杆状病毒表达系统，对6×His-MDV US3蛋白进行表达、纯化并免疫BALB/c小鼠。利用细胞融合技术，经间接ELISA方法、间接免疫荧光试验和细胞克隆，筛选出可稳定分泌MDV US3蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞。筛选抗体效价最高的杂交瘤细胞大量制备并纯化单克隆抗体。检测单克隆抗体的亲和力、亚类和特异性，随后用异硫氰酸荧光素（FITC）标记单克隆抗体，建立直接免疫荧光试验方法。 结果 本研究通过真核表达系统成功制备6×His-MDV US3蛋白，筛选出1株能稳定分泌MDV US3蛋白单克隆抗体的细胞株3D11。经亲和力测定显示，其分泌的单克隆抗体具有良好的亲和力，亲和常数（Kd）为100.6 nmol/L。抗体亚类鉴定结果显示，制备的单克隆抗体为IgG2a亚类，轻链为Kappa型。特异性结果显示，制备的单克隆抗体与除MDV US3蛋白以外的其他蛋白均无交叉反应，特异性良好。经FITC标记单克隆抗体后建立直接免疫荧光试验方法（单克隆抗体稀释度为1∶100）检测MDV，与间接免疫荧光试验检测效果相同且检测时间更短。 结论 本研究成功制备MDV US3蛋白的单克隆抗体，并用FITC标记单克隆抗体，可快速便捷地检测MDV，研究结果可为探究MDV US3蛋白的生物学功能和在细胞水平上快速鉴定MDV感染提供技术支持。

关键词：马立克氏病病毒（MDV）;US3蛋白;单克隆抗体

基金资助：国家自然科学基金青年基金项目(31902245);北京市农林科学院科技创新能力建设专项(KJCX20230428);北京市农林科学院畜牧兽医研究所改革与发展项目(XMS202504)