布鲁氏菌IF-3蛋白生物信息学分析及其多克隆抗体制备

来源：中国畜牧兽医杂志2026年第4期北京时间：

作者：赵彦骁, 吴逸凡, 张孟涛, 戴恩慧, 丁家波, 孙东杰

单位：中国农业科学院北京畜牧兽医研究所，北京 100193

摘要：目的 本研究旨在系统解析布鲁氏菌翻译起始因子3（translation initiation factor 3， IF-3）的生物学特性并制备其多克隆抗体，为阐明IF-3蛋白功能及布鲁氏菌检测技术开发提供试验材料。 方法 通过生物信息学软件分析IF-3蛋白的理化性质、结构特征及进化保守性，参照流产布鲁氏菌（Brucella abortus）infC基因序列（GenBank： AM040264.1）保守区域设计特异性引物，PCR扩增目的基因后，利用同源重组技术将目的基因连接p3×Flag-CMV-7.1表达载体，转化大肠杆菌DH5α感受态细胞，筛选阳性克隆进行扩大培养后提取质粒，转染293F细胞进行真核表达，经Flag标签亲和层析纯化蛋白，并通过SDS-PAGE、Western blotting验证蛋白表达及纯化效果；将纯化后蛋白与水佐剂混合乳化免疫BALB/c小鼠，通过Western blotting和间接ELISA检测多克隆抗体的特异性及效价，并评估IF-3蛋白作为布鲁氏菌检测靶标的应用潜力；通过免疫荧光试验分析IF-3蛋白的亚细胞定位并进一步验证所制备多克隆抗体的特异性。 结果 IF-3为稳定亲水性蛋白，无跨膜结构及信号肽，含6个磷酸化修饰位点，且在布鲁氏菌属内高度保守；PCR成功扩增出402 bp目的基因片段，成功构建p3×Flag-CMV-7.1-IF-3重组质粒。SDS-PAGE和Western blotting检测显示，纯化后的重组蛋白分子质量大小约18.3 ku，且无明显杂带。免疫小鼠后血清经Western blotting验证可特异性识别IF-3蛋白；间接ELISA检测显示，所制备IF-3多克隆抗体的效价达1∶12 800，该多克隆抗体对布鲁氏菌强阳性灭活牛血清反应性较弱。细胞定位分析显示，IF-3蛋白在细胞质、细胞核中均表达，且在细胞核中呈聚集状态。 结论 本研究成功制备了高特异性鼠源IF-3多克隆抗体，其具有良好的反应原性，但作为布鲁氏菌通用检测靶标的应用价值有限。本试验结果为进一步研究IF-3蛋白在布鲁氏菌中的生物学功能提供了试验依据。

关键词：布鲁氏菌;IF-3蛋白;生物信息学分析;多克隆抗体

基金资助：中国博士后科学基金第18批特别资助(2025T180827);中国农业科学院科技创新工程(CAAS-CSLPDCP-202403)