血清8b型禽腺病毒Fiber knob蛋白的原核表达及单克隆抗体制备

来源：中国畜牧兽医杂志2026年第5期北京时间：

作者：刘静瑞, 王泱, 刘琳, 常晶晶, 曹晓阳, 李冰洁, 周雯雯, 周小杰, 刘于漫, 李新生, 宋亚鹏

单位：河南农业大学动物医学院，郑州 450046

摘要：目的 表达纯化血清8b型禽腺病毒（Fowl adenoviruses serotype 8b， FAdV-8b）Fiber knob蛋白，并制备其特异性单克隆抗体，为FAdV-8b特异性检测方法的开发提供参考。 方法 本研究将Fiber knob目的基因插入大肠杆菌原核表达载体pET-30a（+），构建重组表达质粒pET-30a-knob，并通过IPTG诱导表达Fiber knob蛋白。使用纯化后的蛋白免疫BALB/c小鼠，取其脾脏与小鼠骨髓瘤SP/20细胞进行融合，采用间接ELISA方法进行亚克隆筛选。通过ELISA、斑点印迹（Dot blotting）、Western blotting和间接免疫荧光试验（IFA）鉴定单克隆抗体特异性及反应原性，并对单克隆抗体亚型进行鉴定。 结果 经SDS-PAGE和Western blotting分析结果显示，在约40 ku处观察到特异性条带，与预期结果一致，重组Fiber knob蛋白成功表达。纯化后用于小鼠免疫，通过细胞融合、筛选获得4株稳定分泌抗Fiber knob蛋白抗体的杂交瘤细胞，分别命名为1B1、7C1、3D4和10E2。经ELISA、Dot blotting、Western blotting和IFA 鉴定，这4株单克隆抗体仅与Fiber knob蛋白和FAdV-8b HN1472发生特异性反应，而不与FAdV-4 WZ、传染性支气管炎病毒（IBV）、H3N3及H9N2亚型禽流感病毒（AIV）发生交叉反应。亚型分析结果显示，单克隆抗体1B1和7C1的重链为IgG2a类，3D4和10E2的重链为IgG1类，轻链均为Kappa型。 结论 本研究经原核表达系统成功获取了FAdV-8b Fiber knob蛋白，并通过免疫小鼠成功筛选出4株具有优异特异性与良好反应活性的FAdV-8b Fiber knob蛋白单克隆抗体。研究结果为FAdV-8b Fiber knob蛋白的生物学功能研究和FAdV-8b的血清学检测方法提供了参考依据。

关键词：血清8b型禽腺病毒（FAdV-8b）;Fiberknob蛋白;单克隆抗体;原核表达;亚克隆

基金资助：河南省揭榜挂帅科技资助项目(211110111000);河南省高等学校重点科研项目(23B230002);河南省科技攻关项目(232102110083)