鸡TRAF4基因克隆、表达及其在副鸡禽杆菌感染中的免疫负调控功能

来源：中国畜牧兽医杂志2026年第5期北京时间：

作者：车莹暄, 左伟, 陈菲, 王浩楠, 张小荣, 吴艳涛, 楚电峰, 郭梦娇

单位：1.扬州大学兽医学院，扬州 2250092.青岛易邦生物工程有限公司，青岛 266111

摘要：目的 克隆鸡肿瘤坏死因子受体相关因子4（tumor necrosis factor receptor-associated factor 4，TRAF4）基因，解析其生物信息学特征与组织表达谱，并深入探讨其在副鸡禽杆菌（Avibacterium paragallinarum， APG）感染及脂多糖（lipopolysaccharides，LPS）刺激模型中表达量的动态变化及其对下游炎症因子转录的调控作用。 方法 以鸡成纤维细胞系（DF-1）cDNA为模板，采用PCR扩增鸡TRAF4基因编码区（CDS）并测序，将测序所获序列与其他物种TRAF4基因核苷酸序列进行相似性比对，利用Mega 10.2软件构建系统进化树以分析其遗传进化关系。通过生物信息学在线软件对鸡TRAF4蛋白的理化性质、结构域、二级结构和三级结构进行预测。应用实时荧光定量PCR检测TRAF4基因在鸡不同组织中的表达量。通过构建副鸡禽杆菌体内感染和LPS体外刺激模型，检测心脏、脾脏、肺脏组织及DF-1细胞中TRAF4基因表达量。通过构建TRAF4基因真核表达载体，并将其转染至DF-1细胞，探究其对DF-1细胞内炎症因子转录水平的影响。 结果 鸡TRAF4基因CDS长为1 413 bp，编码470个氨基酸残基。系统进化分析显示，鸡TRAF4与野火鸡等鸟类物种亲缘关系最近，在进化树上聚于同一分支。生物信息学预测结果表明，鸡TRAF4蛋白包含1个环指（RING-finger）结构域、3个TRAF类型的锌指（Zinc-finger）结构域和1个MATH结构域；其二级结构中α-螺旋、延伸链和无规则卷曲占比分别为42.55%、11.91%和45.53%，三级结构呈现蘑菇状构象。实时荧光定量PCR结果显示，TRAF4基因在健康鸡不同组织中均有表达，其中肺脏中的表达量最高，显著高于其他组织（P0.05）。过表达试验结果显示，与空载体对照组相比，过表达TRAF4基因后DF-1细胞中炎症因子白细胞介素-1β（IL-1β）和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）转录水平显著下调（P0.05）。 结论 本研究成功克隆鸡TRAF4基因，并构建了其真核表达载体，证实了鸡TRAF4是宿主响应副鸡禽杆菌感染的关键负调控因子之一，其表达下调与炎症因子转录抑制相关。本研究结果为阐明家禽免疫平衡机制及制定相关疫病防控新策略奠定了重要分子基础。

关键词：鸡;TRAF4基因')">TRAF4基因;副鸡禽杆菌;免疫应答

基金资助：国家自然科学基金面上项目(32473205);扬州大学创新创业训练计划(XCX20240810);兽医公共卫生安全全国重点实验室开放基金课题(2024SKIVPHS08)