犊牛源产气荚膜梭菌的分离鉴定及中药止泻散对其耐药性的消除作用

来源：中国畜牧兽医杂志2026年第5期北京时间：

作者：丁瑞, 包福祥, 刘大程, 顾珂瑞, 潘伟杰, 张惠玲, 夏东旭, 施伟, 赵红霞

单位：1.内蒙古农业大学兽医学院，呼和浩特 0100102.国家乳业技术创新中心，呼和浩特 010010

摘要：目的 犊牛腹泻是制约养牛业健康发展的主要疾病之一，产气荚膜梭菌（Clostridium perfringens）是其重要病原体。试验旨在明确内蒙古地区犊牛源A型产气荚膜梭菌的耐药特征，探究中药止泻散对多重耐药产气荚膜梭菌的耐药性消除作用，为临床合理用药及耐药性防控提供科学依据。 方法 采集3个规模化牛场89份腹泻犊牛粪便样本并对其进行细菌分离培养，通过革兰染色、暴烈发酵试验和16S rRNA基因PCR扩增并测序等方法对分离株进行鉴定；采用Kirby-Bauer（K-B）纸片扩散法法检测分离菌株的药物敏感性；通过PCR法检测分离株耐药基因携带情况；采用微量稀释法测定中药止泻散对分离株的最小抑菌浓度（MIC）；将菌株与1/2 MIC浓度的药物作用24、48及72 h后，观察其药物敏感性变化。 结果 89份样品分离出4株疑似产气荚膜梭菌，其在TSC培养基上呈中心为黑色的菌落。在绵羊血琼脂平板上形成双溶血环的菌落，内层完全溶血，外层不完全溶血，类似靶状。革兰染色镜检结果显示，分离菌株呈紫色粗大的杆菌，为革兰阳性菌；暴烈发酵试验呈现典型的“暴烈发酵”现象。经16S rRNA基因PCR鉴定并测序，获得片段大小约1 500 bp的条带， 扩增产物测序拼接后进行比对分析， 各菌株的16S rRNA基因序列与GenBank数据库中已公布的产气荚膜梭菌16S rRNA基因序列（登录号：KP944156.1、CP065681.1、PP627254.1、PQ243300.1）的相似性均超过99%，毒素基因分型PCR扩增结果显示，4株分离株均扩增出大小为288 bp的cap基因目的条带，未扩增出其cpb和etx基因目的条带，表明4株分离株均为A型产气荚膜梭菌，分离率为4.5%（4/89）。所有菌株均表现为多重耐药，对多黏菌素B、阿米卡星等7种药物耐药率超75%，其中对多黏菌素B耐药率达100%。检测出aadA25、Sul1、strA、strB、tetB、qnrA和qnrB 7种耐药基因，strA与strB基因携带率均为100%。中药止泻散对其中1株菌的MIC为25 mg/mL，对另外3株菌的MIC均为6.25 mg/mL。耐药性消除试验显示，中药止泻散可不同程度地消除分离菌株对氧氟沙星和头孢吡肟耐药性，其中在1/2 MIC药物浓度下干预72 h时，耐药性消除效果最为显著。 结论 本研究共分离出4株A型产气荚膜梭菌，所有菌株均具有多重耐药性。中药止泻散对多重耐药的产气荚膜梭菌具有耐药性消除作用。

关键词：犊牛腹泻;产气荚膜梭菌;药敏试验;耐药基因;耐药消除

基金资助：内蒙古一流学科科研专项(YLXKZX-NND-012);国家乳业技术创新中心(2023-JSGG-5)