1株羊源多杀性巴氏杆菌的分离鉴定及其免疫原性研究

来源：中国畜牧兽医杂志2026年第6期北京时间：

作者：杨云川, 高潇祎, 杨元礼, 赖茂林, 谭维, 秦世蓉, 冉智光, 伏刚, 赵扬扬

单位：1.重庆澳龙生物制品有限公司，重庆 4024602.贵州省动物疫病预防控制中心，贵阳 5500083.重庆市畜牧科学院，重庆 4024604.重庆市兽用生物制品工程技术研究中心，重庆 402460

摘要：目的 从病死羊肺脏组织中分离鉴定多杀性巴氏杆菌并进行免疫原性研究，为羊巴氏杆菌病灭活疫苗的研发提供理论依据。 方法 采集病死羊肺脏组织进行细菌分离培养，通过形态学观察、生化鉴定、16S rRNA基因测序及荚膜血清型PCR对分离菌进行鉴定。利用分离菌进行动物回归试验，并制备灭活疫苗，通过免疫攻毒保护试验和免疫持续期试验测定灭活疫苗对靶动物的免疫保护效果。利用小鼠致病性试验和免疫攻毒保护试验测定灭活疫苗对替代动物的免疫保护效果。 结果 分离菌在马丁琼脂上呈针尖大小、灰白色半透明的露珠状单菌落，革兰染色镜检为革兰阴性短杆菌。生化鉴定结果显示，分离菌能发酵葡萄糖、蔗糖、甘露醇等，不分解乳糖和卫矛醇。16S rRNA基因序列BLAST比对结果显示，分离菌与GenBank中多杀性巴氏杆菌相似性达100%。系统进化树结果显示，分离菌与中国西南地区CP033599.1等多杀性巴氏杆菌亲缘关系最近；PCR鉴定荚膜血清型为A型，确定分离菌为A型多杀性巴氏杆菌，命名为Pm-ALa。动物回归试验结果显示，感染羊出现咳嗽、食欲减退、精神萎靡等症状，剖检可见肺脏出现不同程度的病变。将分离菌制备的灭活疫苗免疫羊后21 d攻毒，无临床症状且病原检测阴性，保护率达100%。免疫持续期试验结果显示，疫苗免疫后3、6、9、12个月攻毒保护率均≥80%。替代动物小鼠致病性试验结果显示，小鼠感染分离菌后24 h内出现死亡，根据Reed-Muench法计算出分离菌Pm-ALa对小鼠的半数致死量（LD50）为5.0×102 CFU。灭活疫苗免疫小鼠后21 d进行攻毒，免疫保护率达90%。 结论 本研究分离鉴定出1株羊源A型多杀性巴氏杆菌，其灭活疫苗在靶动物羊和替代动物小鼠中均展现出良好的免疫保护效果，可作为疫苗候选株，研究结果为羊巴氏杆菌病灭活疫苗的开发奠定了基础。

关键词：分离鉴定;A型多杀性巴氏杆菌;致病性;灭活疫苗;免疫保护

基金资助：重庆市博士“直通车”项目(CSTB2024NSCQ-BSX0001)