猪轮状病毒VP6蛋白的真核表达及多克隆抗体制备

来源：中国畜牧兽医杂志2026年第6期北京时间：

作者：陈杰, 杨文卓, 孙康永杰, 唐仲南, 张烁, 黄丽红, 亓文宝

单位：1.华南农业大学兽医学院，动物疫病防控全国重点实验室，广州 5106422.农业农村部人畜共患病重点实验室，广州 5106423.人兽共患病防控制剂国家地方联合工程实验室，广州 510642

摘要：目的 构建猪轮状病毒（Porcine rotavirus，PoRV）VP6蛋白的真核表达体系，制备广谱识别能力强的多克隆抗体，为PoRV的诊断检测和基础研究提供技术支撑。 方法 基于PoRV OSU株VP6基因序列进行密码子优化并构建重组表达质粒pCAGGS-VP6-His，通过测序及双酶切鉴定后，将其瞬时转染至HEK293F悬浮细胞表达重组VP6蛋白，经Ni2＋亲和层析纯化并浓缩，免疫新西兰大白兔制备兔抗重组VP6蛋白多克隆抗体。间接ELISA测定抗体效价，通过Western blotting和间接免疫荧光试验（IFA）验证抗体对PoRV不同基因型毒株的免疫原性和特异性。 结果 成功扩增OSU VP6基因，片段大小为1 279 bp（含同源臂序列）。重组表达质粒双酶切鉴定可见两条清晰的条带，与酶切载体和目的片段大小一致，成功构建重组表达质粒pCAGGS-VP6-His。VP6重组蛋白在HEK293F悬浮细胞中可溶性表达，分子质量约为45 ku。纯化浓缩后蛋白浓度高达5.23 mg/mL，总量为10.5 mg，免疫后成功制备兔抗重组VP6蛋白多克隆抗体，ELISA检测结果显示，该抗体的效价为1∶64 000。Western blotting结果显示，该多克隆抗体可特异性识别PoRV G3、G5和G9基因型病毒感染细胞中的VP6蛋白。IFA结果显示，感染组细胞胞质呈现明显的特异性荧光信号，而对照组未见明显非特异性反应，表明该抗体具有良好的特异性及多基因型识别能力。 结论 本研究成功建立PoRV VP6蛋白的真核高效表达体系，所制备的多克隆抗体具有较强的广谱识别能力，可用于PoRV的快速检测和流行病学调查，同时为VP6蛋白的功能研究奠定了基础。

关键词：猪轮状病毒（PoRV）;VP6蛋白;真核表达;HEK293F悬浮细胞;多克隆抗体

基金资助：特定高校学科建设专项(2023B10564003)