犬细小病毒2型TaqMan探针实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用

来源：中国畜牧兽医杂志2026年第6期北京时间：

作者：安乐乐, 张艺馨, 刘金超, 洪菊霜, 李英奇, 任学斌, Temuujin Uyangaa, 周建华

单位：1.西北民族大学生物医学研究中心，生物工程与技术国家民委重点实验室，兰州 7300302.西北民族大学生命科学与工程学院，兰州 7301003.四川农业大学动物医学院，成都 6111004.蒙古生命科学大学兽医学院，乌兰巴托 17024

摘要：目的 本研究旨在建立一种快速、高效的检测犬细小病毒2型（Canine parvovirus type 2， CPV2）的实时荧光定量PCR方法，以期满足CPV2早期诊断与流行病学调查的迫切需求。 方法 通过比对不同亚型CPV2 VP2基因序列获取保守区域，基于此设计特异性引物和TaqMan探针，构建pMD18-T-CPV2a质粒标准品；经响应面试验设计优化实时荧光定量PCR反应条件并绘制标准曲线；进一步评价本研究建立的检测方法的敏感性、特异性和重复性，从而建立一种特异性检测CPV2 的TaqMan探针实时荧光定量PCR方法；利用建立的方法对59份犬肛拭子临床样本进行检测，评估其在临床样本中的应用可行性。 结果 本研究建立的CPV2 TaqMan探针实时荧光定量PCR方法标准曲线为：y=―3.132x+44.500（R2=0.999），扩增效率为108.59%，显示出良好的线性关系和扩增性能；建立的实时荧光定量PCR方法与犬瘟热病毒（CDV）、犬腺病毒（CAV）等其他常见犬病毒核酸及猫细小病毒（FPV）核酸无交叉反应，特异性强；该方法的最低检出限为10 拷贝/μL，是常规PCR方法的1 000倍，敏感性高；其批内、批间重复性试验变异系数均<1.5%，具有良好的重复性和稳定性。通过本研究建立的方法对59份犬肛拭子临床样本进行检测，结果显示，实时荧光定量PCR方法检测临床样本的阳性检出率为62.71%，高于常规PCR方法（50.85%）。 结论 本研究成功建立了1种CPV2 TaqMan探针实时荧光定量PCR检测方法，该方法线性关系良好，且敏感度较高、特异性强，具有良好重复性，可快速、高效、特异性检出临床样本CPV2。本研究结果为CPV2临床诊断和流行病学调查提供了1种高效的检测技术手段。

关键词：犬细小病毒2型（CPV2）;VP2基因')">VP2基因;TaqMan探针;实时荧光定量PCR

基金资助：国家自然科学基金(32360874);甘肃省自然科学基金(23JRRA715);西北民族大学引进人才科研项目(xbmuyjrc202225);创新训练项目(202310742010)