稳定表达猪德尔塔冠状病毒S蛋白的CHO细胞株的建立

来源：中国畜牧兽医杂志2026年第7期北京时间：

作者：赵志明, 于瑞明, 张莉萍, 白英杰, 王东升, 潘丽, 刘新生, 刘霞, 张中旺

单位：1.甘肃农业大学生命科学技术学院，兰州 7300702.中国农业科学院兰州兽医研究所，动物疫病防控全国重点实验室，兰州 730046

摘要：目的 构建稳定表达猪德尔塔冠状病毒（PDCoV）S蛋白的CHO细胞株，为后续开展PDCoV的病原学研究、临床诊断方法建立、疫苗研发及抗体筛选与评价提供可靠的试验材料。 方法 将编码PDCoV S蛋白基因的真核表达质粒pcDNA3.1（+）-PDCoV-S线性化后转染ExpiCHO-S细胞，使PDCoV S 基因整合入CHO细胞基因组。经2轮遗传霉素（G418）筛选和有限稀释克隆获得单克隆细胞株，采用Dot-blotting进行初筛，并通过RT-PCR和Western blotting对单克隆细胞株进行分子鉴定，以验证目的基因的整合和蛋白表达情况。利用CCK-8试剂盒检测细胞增殖活性评价单克隆细胞株的活性和生长速度。采用Ni亲和层析方法对其表达产物进行纯化，用BCA方法测定纯化蛋白的浓度。将扩增后的单克隆细胞株连续传代20代，并每隔5代冻存，使用SDS-PAGE和Western blotting分析多代传代后的蛋白表达稳定性。 结果 成功建立1株能稳定表达PDCoV S蛋白的CHO单克隆细胞株。Western blotting和RT-PCR结果表明，PDCoV S 基因已成功整合至ExpiCHO-S细胞基因组中，且单克隆细胞株表达产物能与PDCoV阳性血清发生特异性结合。细胞活性检测结果表明，将PDCoV S基因整合入ExpiCHO-S细胞基因组不会影响其细胞活性及生长速度。BCA法测得单克隆细胞株蛋白表达量为0.8 mg/mL。稳定性研究中，该细胞株经20代连续传代后仍能稳定生长，且20代的表达量较0代仅下降8.82%，表明所建细胞株具有良好的遗传和表达稳定性。 结论 成功建立了能稳定表达PDCoV S蛋白的CHO细胞株，并证实其在长期传代过程中仍保持较高的表达稳定性，该细胞株可为PDCoV的诊断试剂开发和疫苗研究提供重要材料。

关键词：猪德尔塔冠状病毒（PDCoV）;CHO细胞;S蛋白;单克隆细胞株

基金资助：甘肃省科技重大专项(23ZDNA007);国家现代产业技术体系资助项目(CARS-35)