牛肠道病毒VP3蛋白的原核表达及其多克隆抗体制备

来源：中国畜牧兽医杂志2026年第7期北京时间：

作者：杨雨桐, 李秋稷, 张海龙, 梁俊杰, 高明春, 曹永生

单位：东北农业大学，哈尔滨 150030

摘要：目的 利用原核表达系统制备牛肠道病毒（Bovine enterovirus，BEV）VP3蛋白，并以其为免疫原制备多克隆抗体，为后续研究BEV VP3功能及BEV防控相关生物制品研制奠定基础。 方法 以pBluescript SK（-）-BEV 3531重组质粒为模板，通过PCR扩增BEV VP3基因，连接至pCold原核表达载体，构建含His标签的pCold-VP3重组质粒，将其转化大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞后，利用IPTG进行诱导表达，经过超声破碎和Ni-NTA亲和层析纯化，获得重组BEV VP3蛋白。纯化后的蛋白经梯度透析复性后用于免疫小鼠制备多克隆抗体。通过ELISA、Western blotting、间接免疫荧光试验（IFA）及血清中和试验分别对多克隆抗体的效价、反应性、特异性及病毒中和活性进行鉴定。 结果 成功扩增获得长度为729 bp的BEV VP3基因。重组BEV VP3蛋白主要以包涵体形式表达，分子质量约30.7 ku。纯化后蛋白稳定，复性效果良好。间接ELISA结果表明，免疫小鼠所得多克隆抗体效价至少可达1∶12 800；Western blotting结果表明，该抗体可在BEV感染细胞中特异性识别VP3蛋白；IFA结果表明，该抗体可清晰标记BEV感染细胞，显示出良好的特异性和敏感性；血清中和试验结果表明，该抗体能明显抑制BEV感染细胞，说明其具有一定的病毒中和活性。 结论 本研究成功制备了高纯度、具有免疫活性的重组BEV VP3蛋白及其多克隆抗体，为进一步建立BEV VP3相关ELISA血清学检测方法、开发亚单位疫苗及探讨BEV感染中VP3的作用提供了可靠的试验材料。

关键词：牛肠道病毒（BEV）;VP3蛋白;原核表达;多克隆抗体

基金资助：财政部和农业农村部：国家现代农业产业技术体系(CARS36);黑龙江省现代农业奶牛产业技术协同创新推广体系(230000237613110000244);东北农业大学人才引进项目